一种用于草酸生产的黑曲霉基因编辑菌株及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN118638838B

    公开(公告)日:2025-03-04

    申请号:CN202410355275.0

    申请日:2024-03-27

    Applicant: 南京大学

    Abstract: 本发明涉一种黑曲霉基因编辑菌株的构建方法,属于生物工程技术领域。该黑曲霉基因编辑菌株为:以黑曲霉为出发菌株,过表达草酰乙酸乙酰水解酶基因oahA、敲除柠檬酸转运子基因citT或同时过表达草酰乙酸乙酰水解酶基因oahA和敲除柠檬酸转运子基因citT,获得的黑曲霉基因编辑菌株。本发明还提供了编辑菌株的构建、筛选和传代培养的方法以及菌株发酵生产草酸及定量分析有机酸产物的方案。与现有技术相比,本发明的黑曲霉编辑菌株活力强,产酸能力强,并且发酵生产的有机酸中草酸占主导,为草酸的发酵生产、真菌有机酸代谢调控以及生物冶金相关研究提供了理论模型和技术支撑。

    脱乙酰基酶突变体及其在合成烯草酮中的应用

    公开(公告)号:CN119506255A

    公开(公告)日:2025-02-25

    申请号:CN202411441421.8

    申请日:2024-10-16

    Abstract: 本发明属于基因工程和酶学领域,具体涉及脱乙酰基酶突变体及其在合成烯草酮中的应用,所述脱乙酰基酶突变体是由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第272位、92位、203位、304位、305位、306位、270位进行单点突变或多点突变,得到了对底物氯代乙酰胺特异性提高的突变体,其可以催化底物氯代乙酰胺合成氯代胺,用于后续烯草酮的生产,与野生型相比,突变体Y305E、Y305E/G304L、Y305E/H306F相对酶活提高分别是野生型的7.8倍、9.6倍、10.3倍,其中Y305E催化效率比野生型提高3.2倍,Y305E/H306F的催化效率比野生型提高4.2倍。使用本发明提供的脱乙酰基酶突变体合成氯代胺时,反应条件温和、对环境无害,且反应时间短,具有大规模生产氯代胺以及后续产品的应用前景。

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