本发明公开了一种靶向敲除猪ATP11C基因的sgRNA、sgRNA组合物、载体及应用，属于生物技术领域。该sgRNA为sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3、sgRNA4、sgRNA5、sgRNA6中的任一种。本发明针对猪ATP11C基因靶点，设计特异性靶向敲除猪ATP11C基因的sgRNA，从而高效、精准对猪ATP11C基因进行特异性敲除，并且得到稳定敲除ATP11C基因的猪肾成纤维细胞，并且，敲除ATP11C基因后显著抑制猪肾成纤维细胞的增殖，这为通过体细胞克隆技术生产具有相关疾病模型特征的克隆猪奠定了坚实基础，进而为与ATP11C相关的疾病治疗等研究提供了有利的实验材料。