公开(公告)号：CN119552904A

公开(公告)日：2025-03-04

申请号：CN202411777706.9

申请日：2024-12-04

Applicant: 河北师范大学

Inventor： 李清扬 ,  刘旭冉 ,  焦天悦 ,  郭宁 ,  王天宜 ,  樊建晔 ,  赵若晗 ,  张禹 ,  赵宝华

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12P19/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供了一种少动鞘氨醇单胞菌CRISPRi/dCas12a基因调控系统及其构建方法和应用，具体属于基因工程技术领域。本发明的基因调控系统包括pBBR1‑dCas12a‑crRNA质粒，所述质粒包括pBBR1复制子、dCas12a基因、crRNA表达盒和氯霉素抗性基因；所述crRNA表达盒包括一个Ptac启动子、两个DR片段和一个rrnB T1终止子。本发明所述系统能够在少动鞘氨醇单胞菌中稳定表达，抑制基因的转录，来降低特定基因的表达，而不修改其DNA序列，对S.paucimobilis有较小的毒性，宿主生长速度快，且能够实现dcas12a的高效表达。

公开(公告)号：CN117264989A

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202311246816.8

申请日：2023-09-26

Applicant: 河北师范大学

Inventor： 李清扬 ,  焦天悦 ,  水小溪 ,  张禹 ,  赵宝华 ,  张国沛 ,  胡秋宇

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66 ,  C12N15/67 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种少动鞘氨醇单胞菌的CRISPRi/dCas9基因抑制系统及其构建方法和应用，属于基因编辑技术领域。本发明将dcas9基因片段(包括sgRNA序列)、pBBR1复制子片段及cmr基因连接起来，以构建精简的CRISPRi系统pBBR1‑dCas9‑CmR；再将dcas9及sgRNA的启动子更换为Ptac，最后连接sgRNA的表达序列，构建得到pBBR1‑Ptac‑dCas9‑sgRNA重组质粒，即为优化后的CRISPRi/Cas9系统。本发明所述优化后的CRISPRi/Cas9系统可用于S.paucimobilis，可以更好的调控S.paucimobilis的代谢通路。