公开(公告)号：CN117264989A

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202311246816.8

申请日：2023-09-26

Applicant: 河北师范大学

Inventor： 李清扬 ,  焦天悦 ,  水小溪 ,  张禹 ,  赵宝华 ,  张国沛 ,  胡秋宇

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/66 ,  C12N15/67 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种少动鞘氨醇单胞菌的CRISPRi/dCas9基因抑制系统及其构建方法和应用，属于基因编辑技术领域。本发明将dcas9基因片段(包括sgRNA序列)、pBBR1复制子片段及cmr基因连接起来，以构建精简的CRISPRi系统pBBR1‑dCas9‑CmR；再将dcas9及sgRNA的启动子更换为Ptac，最后连接sgRNA的表达序列，构建得到pBBR1‑Ptac‑dCas9‑sgRNA重组质粒，即为优化后的CRISPRi/Cas9系统。本发明所述优化后的CRISPRi/Cas9系统可用于S.paucimobilis，可以更好的调控S.paucimobilis的代谢通路。

公开(公告)号：CN116218894A

公开(公告)日：2023-06-06

申请号：CN202310057133.1

申请日：2023-01-19

Applicant: 河北师范大学

Inventor： 水小溪 ,  李清扬 ,  陈佳乐 ,  张禹 ,  赵宝华

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种少动鞘氨醇单胞菌CRISPRi系统、其构建方法及应用，属于基因工程技术领域，构建方法包括以下步骤：1)筛选能够在少动鞘氨醇单胞菌中稳定复制表达的载体；2)用载体的复制子片段替换质粒plv‑dCas9‑sgRNA的复制子片段，获得重组质粒pBBR1‑dCas9‑sgRNA，即CRISPRi系统；3)确定目的基因并设计sgRNA，验证CRISPRi系统的抑制效率。该CRISPRi系统包括携带sgRNA表达盒和dCas9基因的表达载体，所述载体携带氯霉素抗性。本发明构建成功的CRISPRi系统通过电转化的方法转化到少动鞘氨醇单胞菌中可以实现对菌株的遗传操作。

公开(公告)号：CN119552904A

公开(公告)日：2025-03-04

申请号：CN202411777706.9

申请日：2024-12-04

Applicant: 河北师范大学

Inventor： 李清扬 ,  刘旭冉 ,  焦天悦 ,  郭宁 ,  王天宜 ,  樊建晔 ,  赵若晗 ,  张禹 ,  赵宝华

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12P19/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供了一种少动鞘氨醇单胞菌CRISPRi/dCas12a基因调控系统及其构建方法和应用，具体属于基因工程技术领域。本发明的基因调控系统包括pBBR1‑dCas12a‑crRNA质粒，所述质粒包括pBBR1复制子、dCas12a基因、crRNA表达盒和氯霉素抗性基因；所述crRNA表达盒包括一个Ptac启动子、两个DR片段和一个rrnB T1终止子。本发明所述系统能够在少动鞘氨醇单胞菌中稳定表达，抑制基因的转录，来降低特定基因的表达，而不修改其DNA序列，对S.paucimobilis有较小的毒性，宿主生长速度快，且能够实现dcas12a的高效表达。