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公开(公告)号：CN119432960A
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202411903041.1
申请日：2024-12-23
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明属于生物催化领域，具体涉及一种双酶偶联制备氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的方法。本发明通过一锅法双酶偶联催化体系的构建和优化，以含烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶NMNAT的基因工程菌和含NAD激酶的基因工程菌为全细胞催化剂，以烟酰胺单核苷酸NMN为起始底物，添加腺苷三磷酸盐和多聚磷酸盐、二价金属离子盐，一锅法高效催化合成氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP+，将全细胞催化反应液分离纯化后，获得NADP+。本发明的双酶催化方法反应路线短，原子经济性高，降低现有生产成本且生产周期短，易于下游分离纯化，可适易于NADP+的规模化、放大化生产。
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公开(公告)号：CN112908417B
公开(公告)日：2025-01-10
申请号：CN202011613020.8
申请日：2020-12-30
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种功能序列和结构模拟相结合的基因挖掘方法、NADH偏好型草铵膦脱氢酶突变体及应用。所述基因挖掘方法包括：(1)分析NADH型谷氨酸脱氢酶应具备的特性序列；(2)根据特征序列搜索基因库；(3)对搜索获得的基因进行聚类分析和蛋白结构模拟；(4)选择基因聚合度高且蛋白结构与已知草铵膦脱氢酶结构类似的基因作为候选基因。经基因挖掘得到来源于堆肥赖氨酸杆菌(Lysinibacillus composti)氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的野生型草铵膦脱氢酶，并经过突变筛选到NADH偏好型草铵膦脱氢酶突变体，突变位点选自以下一种：(1)A144G‑V375F‑M91A；(2)A144G‑V345A‑M91A；(3)A144G，该突变体酶能够利用廉价的辅酶NAD进行催化反应。
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公开(公告)号：CN118853627A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202411100239.6
申请日：2024-08-12
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及酶催化技术领域，公开了烟酰胺核糖激酶突变体及其在合成芳香族化合物中的应用。本发明提供的烟酰胺核糖激酶突变体，与野生型相比，通过在第65位、第118位、第135位、第167位、第170位、第171位、第214位进行单点或多点突变，热稳定性得到了不同程度的提高，特别是第214位天冬酰胺突变为缬氨酸的突变体以及第171位色氨酸突变为缬氨酸的突变体，其酶活及热稳定性大大提高，更适于工业化应用。
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公开(公告)号：CN114540440B
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202210191410.3
申请日：2022-03-01
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种加压催化制备2‑羰基‑4‑(羟基甲基膦酰基)丁酸的方法，包括以下步骤：以外消旋型草铵膦为底物，加入共表达重组大肠杆菌湿菌体、pH调节剂调控反应体系的pH在6.5~9.0，反应过程在密封、通风、加压的条件下进行；重组大肠杆菌可共表达D‑氨基酸氧化酶和过氧化氢酶；反应过程至少包括以下两个阶段：第一反应阶段，控制反应体系处于第一通气量和第一压力状态；第二反应阶段，控制反应体系处于第二通气量和第二压力状态；第一通气量大于第二通气量，第一压力大于第二压力。本发明通过控制反应过程不同反应阶段的通气量和压力以使得反应体系中的D‑氨基酸氧化酶保持较高的酶催化活性，缩短催化反应时间并提高酶催化转化效率。
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公开(公告)号：CN118530958A
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410569300.5
申请日：2024-05-09
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种转氨酶突变体及在合成西他列汀中间体中的应用，所述转氨酶突变体是将SEQ ID NO.11所示氨基酸序列第213位、72位、188位进行单突变或多突变获得的。本发明提供的活性以及热稳定性提高的全新转氨酶突变体，能够在不依赖于助溶剂情况下高效合成西他列汀中间体，所涉及的底物浓度、转化率、产物对映体选择性等多项指标均高于现有水平，对实现西他列汀的高效、绿色生物合成具有推动作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118530957A
公开(公告)日：2024-08-23
申请号：CN202410569295.8
申请日：2024-05-09
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种工业催化用转氨酶突变体及在合成西他列汀或中间体中的应用，所述转氨酶突变体是将SEQ ID NO.11所示氨基酸序列第189位、236位、121位进行单突变或多突变获得的。本发明提供的全新的转氨酶突变体，能够用于高效合成西他列汀或中间体，所用的底物浓度、转化率、产物对映体选择性等多项指标均高于文献报道水平，对实现西他列汀的绿色生物制造创新具有重要意义。
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公开(公告)号：CN115354034B
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202210441521.5
申请日：2022-04-25
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种NADP依赖型甲酸脱氢酶突变体、辅酶再生体系及其在制备L‑草铵膦铵盐中的应用，所述甲酸脱氢酶突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第198位、第221位、第246位、第272位或第379位中的一个或多个突变获得的。本发明甲酸脱氢酶突变体对NADP有较高亲和力，能高效地为氧化还原体系不断提供NADPH，突变体ApFDH‑A1对NAD的活力提高了0.38倍，对NADP的活力提高了11倍。利用甲酸脱氢酶突变体构建辅酶循环体系制备L‑草铵膦中，200mM底物转化率高达100％、副产物二氧化碳易于排出反应体系，产物分离纯化更方便，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN117946998A
公开(公告)日：2024-04-30
申请号：CN202410142855.1
申请日：2024-02-01
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶突变体及其应用。本发明将烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶的氨基酸序列进行了以下位点单点突变或组合突变得到：(1)第97位丝氨酸S突变为丙氨酸A；(2)第10位谷氨酰胺Q突变为丙氨酸A；(3)第119位苯丙氨酸F突变为色氨酸W。本发明提供的烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶突变体活性、催化效率均较野生型都有显著的提高。
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公开(公告)号：CN114350631B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202111646663.7
申请日：2021-12-30
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种草铵膦脱氢酶突变体、工程菌、固定化细胞及应用，所述突变体是将SEQ ID No.2所示草铵膦脱氢酶氨基酸序列的第145位、第384位、第348位、第292位、第202位、第70位、第78位进行单突变或多突变获得的。本发明草铵膦脱氢酶突变体与甲酸脱氢酶共表达工程菌的固定化细胞，以2‑羰基‑4‑(羟基甲基膦酰基)‑丁酸底物催化还原为L‑草铵膦，实现不对称合成L‑草铵膦，无需昂贵的化学拆分试剂，提高其热稳定性和操作稳定性，实现重复使用。固定化细胞酶活为162.5U/g，酶活回收率为78.1％，可以通过过滤回收，并可重复使用20批次以上保持100％转化率，极大降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN117701523A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202311686288.8
申请日：2023-12-08
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种溶剂耐受型转氨酶突变体、工程菌及在制备西他列汀中间体中的应用，所述ω‑转氨酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第60位、第92位、第186位进行单位点或多点联合突变获得。本发明转氨酶突变体以西他列汀中间体前体酮为底物，异丙胺为氨基供体，磷酸吡多醛为辅酶，二甲基亚砜为助溶剂，生物催化制备高光学纯度的西他列汀中间体，不仅有机溶剂耐受性高(在二甲基亚砜体积终浓度为50％反应体系下半衰期达28.4h)，且产物立体选择性高(产物e.e.值达到99％)，具有较好工业应用前景。
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