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公开(公告)号：CN118703467A
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202411057827.6
申请日：2024-08-02
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种O‑琥珀酰‑L‑高丝氨酸巯基转移酶突变体及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示的O‑琥珀酰‑L‑高丝氨酸巯基转移酶氨基酸序列的第59位、第119位进行单突变或多突变获得的。本发明通过半理性设计，定点突变技术改造MetZ，最终获得了在不损失酶活力的情况下对高浓度甲硫醇钠环境下耐受性提高的突变体。本发明的突变体对甲硫醇钠的耐受性大幅提高，由突变前的5％提高到15％，具有很大工业价值。本发明突变体对底物的转化率显著提高，有利于生产应用。
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公开(公告)号：CN118496115A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410534480.3
申请日：2024-04-30
申请人： 浙江工业大学
IPC分类号： C07C227/40 , C07C229/22
摘要： 本发明公开了一种利用双水相萃取分离发酵液中L‑高丝氨酸的方法，通过筛选合适的有机溶剂/无机盐构建双水相萃取体系，通过预处理、双水相萃取、脱色、结晶等操作，能够从L‑高丝氨酸发酵液中高效分离L‑高丝氨酸，且得到较高纯度的产品，减少氨基酸分离提取步骤，加入的无机盐、有机溶剂等都可以得到很好的回收，降低了分离过程的三废排放，对于大规模的生产而言解决生产能力有限的问题，操作方法简单，成本也较低。
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公开(公告)号：CN118147034A
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202410412745.2
申请日：2024-04-08
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高产L‑半胱氨酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过抑制磷酸转移系统介导的葡萄糖摄取方式，减少磷酸烯醇式丙酮酸向丙酮酸的转化，有助于削弱碳代谢流向丙酮酸的流动；通过过表达Glk/GalP介导的葡萄糖摄取系统，增强磷酸转移系统抑制后导致的葡萄糖摄取减弱问题，并进一步加强葡萄糖的同化效率，提高L‑半胱氨酸生物合成的碳代谢通量；通过利用表达水平更强的Trc衍生启动子驱动关键基因cysEf的表达，解决L‑半胱氨酸生物合成的碳代谢流增强后导致的L‑半胱氨酸前体——L‑丝氨酸积累问题，促进前体向L‑半胱氨酸的高效转化，实现了L‑半胱氨酸的高效合成。
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公开(公告)号：CN118147033A
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202410412742.9
申请日：2024-04-08
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及一种高产L‑半胱氨酸的基因工程菌、构建方法及其应用。本发明通过减少发酵过程中副产物积累以及提高目标代谢物的外转运效率来促进L‑半胱氨酸的生产，即通过敲除乳酸合成途径，限制丙酮酸向乳酸的转化，促进碳代谢流向L‑半胱氨酸生物合成途径的集中，来提高L‑半胱氨酸的产量；通过过表达L‑半胱氨酸转运蛋白基因的表达，促进L‑半胱氨酸向细胞外的出口，降低细胞内的L‑半胱氨酸浓度，提高L‑半胱氨酸的胞外积累水平；通过引入L‑半胱氨酸动态响应的启动子PyhaO驱动L‑半胱氨酸转运蛋白的表达，解决在高强度的L‑半胱氨酸出口效率下的L‑丝氨酸竞争出口问题，使得L‑半胱氨酸产量的显著提升至7.19g/L。
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公开(公告)号：CN118109465A
公开(公告)日：2024-05-31
申请号：CN202410162858.1
申请日：2024-02-05
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种D‑天冬氨酸氧化酶启动子突变体及其应用，所述启动子突变体核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明提供了一种D‑天冬氨酸氧化酶启动子突变体，成功实现D‑天冬氨酸氧化酶在E.coli BL21(DE3)中目的蛋白高水平表达，酶活可达178.79±8.57U/mg，且可高效催化底物转化为α‑酮戊二酸，实现500mM D‑Glu的完全转化。与带有原生启动子的D‑天冬氨酸氧化酶相比，本发明带有启动子突变体的D‑天冬氨酸氧化酶的蛋白浓度和时空转化率分别提高了4.47、1.54倍。
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公开(公告)号：CN118064517A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202410157006.3
申请日：2024-02-04
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明公开了一种提高筑波链霉菌发酵合成他克莫司产量的方法，本发明通过在筑波链霉菌ZJXM0002合成他克莫司的过程中加入外源因子，能够进一步促进他克莫司合成途径中的某些关键途径和通路，从而增强他克莫司合成途径，提高他克莫司产量；且本发明操作简单，不需要额外的人工和设备，仅通过较低的附加投入，就可以提高目标产物FK506的产量，从而降低成本。当邻苯二甲酸二甲酯的添加时间为0h且添加浓度为0.2g/L，3,4‑二羟基‑1‑苯丙氨酸的添加时间为72h且添加浓度为0.05g/L时FK506产量最高达到81.6±1.8mg/L，提高了45.9％。
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公开(公告)号：CN117904066A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202410092889.4
申请日：2024-01-23
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明提供了一种重组羰基还原酶突变体，由Rhodosporidium toruloides ZJB2014212来源的重组羰基还原酶其氨基酸序列第25位天冬氨酸突变为苏氨酸获得。该重组羰基还原酶突变体相较野生型酶具有高活性、高立体选择性，进一步提高了对底物前体酮的催化效率。将所述的重组羰基还原酶突变体应用于生物酶法合成手性醇，对底物前体酮进行不对称催化还原，相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力有所提高，反应进程耗时缩短。此外，本发明在催化制备手性醇中的反应体系中，构筑了单酶双底物耦联体系，选择了异丙醇作为辅酶再生体系的辅助底物，可有效节约生产成本，对于生物酶法催化制备手性醇的工业应用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN117757713A
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202410006906.8
申请日：2024-01-03
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种不依赖β‑丙氨酸添加的高产D‑泛酸基因工程菌、构建方法及应用。本发明运用基因编辑技术，在现有工程菌的基础上进一步强化D泛酸生物生成途径中关键酶的表达水平以及β‑丙氨酸生物生成途径中关键酶的表达水平，得到了一株发酵过程中不添加β‑丙氨酸的高产菌株。本发明所有菌株中摇瓶效价最高达到2.97g/L，相比出发菌株，在发酵过程中省去了外源β‑丙氨酸的添加，大大节约了发酵成本，简化了发酵流程，适合于大规模工业化生产应用。此外，本发明产D‑泛酸的基因工程菌ZPA18在摇瓶发酵中泛酸产量提高至3.34g/L，5L发酵罐补料发酵83h后产量达到46.15g/L。
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公开(公告)号：CN117603820A
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202311590784.3
申请日：2023-11-27
申请人： 浙江工业大学
摘要： 本发明提供了一种高产虫草素的蝙蝠蛾拟青霉液体发酵培养基，所述培养基包括代谢添加剂、丙酮酸中的一种或两种。本发明通过对液体发酵培养基以及发酵工艺的精准调控，进一步提高了蝙蝠蛾拟青霉菌株菌丝体、活性产物虫草素和腺苷的得率。蝙蝠蛾拟青霉菌株在含有终浓度1000mg/Lβ‑丙氨酸或10mg/L的腺嘌呤的培养基中于最优发酵工艺条件下进行发酵后，每升液体发酵培养基中虫草素的产量相比于未优化条件下提高了约四倍。本发明提供的培养基配方简单，原料易得，且成本低廉，配合优化后的发酵工艺下，在更短的发酵时间内大幅提高了菌丝体得率及腺苷、虫草素的产量。
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公开(公告)号：CN117511841A
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202311568389.5
申请日：2023-11-22
申请人： 浙江工业大学
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/78 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/55 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12P19/44 , C12R1/40
摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种高产鼠李糖脂的基因工程菌、构建方法及应用。本发明提供的提高鼠李糖脂产量的基因工程菌rhlAB‑ΔalgD，通过在恶臭假单胞菌KT2440基因组中敲除algD基因使更多的葡萄糖‑6‑磷酸被重新分配到dDTP‑L‑鼠李糖的支路上，从而使鼠李糖脂的产量提高了16.8％；本发明提供的提高鼠李糖脂产量的基因工程菌rhlAB‑Δflag，通过在恶臭假单胞菌KT2440基因组中敲除flag基因簇使菌株的能量(ATP)和还原力(NADPH)过剩，从而使鼠李糖脂的产量提高了2倍；本发明提供的高产鼠李糖脂的基因工程菌rhlAB‑rmlBDAC‑Δflag，在突变株rhlAB‑Δflag的基础上异源过表达来自铜绿假单胞菌PAO1的rmlBDAC基因簇来增加dDTP‑L‑鼠李糖的供应，使得恶臭假单胞菌KT2440中的鼠李糖脂产量进一步提高。
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