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公开(公告)号：CN117887601B
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202410170388.3
申请日：2023-07-20
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种低乙醇合成量酿酒酵母及其构建的高乙酰辅酶A合成的菌株，属于生物技术领域。本发明为降低酿酒酵母中主要的副产物乙醇的积累量，同时增加乙酰辅酶A的合成量，对MTH1、MED2和HXT2转录因子进行改造，筛选得到降低乙醇合成量的最优转录因子组合，再对整合在酿酒酵母基因组上的不同合成途径的异源的乙酰辅酶A合成途径进行比较，提供了一种重组酿酒酵母菌株。该菌株可实现以葡萄糖为碳源的无菌培养基中生长，为代谢工程改造酿酒酵母合成高价值化合物搭建了平台，且构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
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公开(公告)号：CN117417407B
公开(公告)日：2024-07-19
申请号：CN202311365367.9
申请日：2023-10-20
申请人： 江苏集萃未来食品技术研究所有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种在微生物中形成可逆无膜细胞器的方法。本发明为了在宿主细胞中形成无膜细胞器，在固有无需蛋白RGG的基础上融合了人工短肽序列WRG‑1，融合1个或2个WGR‑1串联序列都可以有效促进RGG的相分离，在酿酒酵母中形成无膜细胞器，其中无膜细胞器RGG‑(WGR‑1)2具有更好的液体流动性。本发明进一步通过在RGG‑(WGR‑1)2系统中引入酶切位点x，构建RGG‑x‑(WGR‑1)2，在诱导蛋白酶表达后，实现了无膜细胞器的可逆形成。本发明的方法在定制和控制细胞功能等方面具有重要价值。
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公开(公告)号：CN114874967B
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202210690512.X
申请日：2022-06-17
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/55 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/53 , C12N15/56 , C12N15/31 , C12P19/26 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明构建的重组大肠杆菌(Escherichia coli)是由大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，通过在基因组上敲除nanATEK基因,nagABE基因、manXYZ基因、poxB基因，并引入外源的UDP‑N‑乙酰氨基葡糖‑2‑差向异构酶编码基因NeuC和N‑乙酰神经氨酸合酶编码基因NeuB，并且重组表达由诱导型启动子T7调控的内源酶glmM，glmU和glmS突变体glmSA而得到的一株产N‑乙酰神经氨酸的重组菌株，其产量达到3.85g/L，为工业化生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116144518B
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202310247272.0
申请日：2023-03-15
申请人： 江南大学 , 浙江昂利康制药股份有限公司
IPC分类号： C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/31 , C12N15/52 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/61 , C12P23/00 , C12R1/865
摘要： 本发明公开了一种生产视黄醇的酿酒酵母菌株及其应用，构建方法为：以酿酒酵母为出发菌株，引入外源基因crtE、crtB、crtI、crtYB、blh，在酵母细胞中构建视黄醇合成途径，通过多元模块化工程优化视黄醇的代谢网络，将视黄醇合成途径分为5个模块进行代谢调控，再通过转运体工程敲除转运蛋白Pdr5p，最后利用酶的半理性改造提高关键酶的催化效率，将突变后的脱氢酶基因ENV9与大肠杆菌来源的脱氢酶基因ybbo组合整合在酿酒酵母基因组中，视黄醇产量达到387.4mg/L。最后优化培养基发酵条件，添加橄榄油作为萃取剂，摇瓶水平上视黄醇的产量达到1.2g/L。
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公开(公告)号：CN117645985B
公开(公告)日：2024-06-04
申请号：CN202311593867.8
申请日：2023-11-27
申请人： 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶突变体及其应用，属于生物技术领域。本发明以来源于多形拟杆菌Bacteroides thetaiotaomicron VPI‑5482的乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶为出发序列，通过突变位点的筛选及验证，发现了一种能够提高此酶的底物专一性和催化活力的突变体，将该突变体引入基因工程大肠杆菌中后进行发酵验证，发现N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量最高可达224g/L，与转化突变前pET28a‑BT4131的对照菌株相比，发酵液中乙酰氨基葡萄糖浓度提高了49.3％，在工业生产上具有十分广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN117778481A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311818244.6
申请日：2023-12-27
摘要： 本发明公开了一种全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌为出发菌株，构建了表达L‑亮氨酸脱氢酶L‑AAD和ɑ‑酮异己酸双加氧酶ɑ‑KICD的基因工程重组大肠杆菌，并对其融合表达方式进行优化，得到的重组菌作为全细胞催化剂，以L‑亮氨酸为底物构建全细胞催化体系用于生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸。利用本发明提供的全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸具有操作简单、成本低、效率高的特点，具有十分广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN117778217A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311822032.5
申请日：2023-12-27
IPC分类号： C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/90 , C12P7/6409 , C12R1/645
摘要： 本发明公开了一种产神经酸的解脂耶氏酵母及其构建方法和应用，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过在解脂耶氏酵母中异源表达多种3‑酮酯酰‑CoA合酶KCS，多种酯化酶，并强化表达了omega‑9去饱和酶、ATP‑柠檬酸裂解酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、乙酰辅酶A羧化酶和内质网调节因子，进一步敲除过氧化物酶体生物发生因子10基因、三酰甘油脂肪酶4基因、AMP‑蛋白激酶基因和△12去饱和酶基因，从而使神经酸的产量在摇瓶条件下达到了0.22g/L；经补料分批发酵后神经酸的产量可以达到8g/L，神经酸的占总油脂的比例达12％。本发明提供的方法为人工高效合成神经酸奠定了基础，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN114854612B
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202210306674.9
申请日：2022-03-25
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一株产L‑乳酸的酿酒酵母的改造及其应用，属于定向代谢技术领域。本发明以酿酒酵母TJG12作为出发菌株，通过敲除酿酒酵母TJG12中的NADH脱氢酶NDE1和NDE2以及苹果酸脱氢酶1，并增强了苹果酸脱氢酶2的表达，同时异源表达来源于大肠杆菌的6‑磷酸果糖激酶pfkA及来源于乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶LLDH等改造，提升了酿酒酵母对L‑乳酸的生产性能，可使摇瓶产量从29.5g/L提升至47.7g/L。有利于进一步提升L‑乳酸的生产性能。
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公开(公告)号：CN117535362A
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202311488717.0
申请日：2023-11-09
申请人： 江南大学 , 鄂尔多斯市中轩生化股份有限公司
IPC分类号： C12P19/26 , C12N1/21 , C12N15/56 , C12N15/55 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/61 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12R1/19
摘要： 本发明公开了一种基于蛋白组装支架合成乳酰‑N‑新四糖的方法，属于代谢工程技术领域。本发明基于合成乳酰‑N‑新四糖中关键酶在空间上分布分散，造成中间体扩散，最终导致胞内酶促反应速率降低的问题，使用质粒异源表达了含有融合小肽SH3lig的β‑1,3‑N‑乙酰氨基葡萄糖氨基转移酶lgtA和含有融合小肽PDZlig的β‑1,4‑半乳糖基转移酶lgtB，同时融合表达蛋白组装支架PDZ和SH3，构建了一种基于蛋白组装支架合成乳酰‑N‑新四糖的重组大肠杆菌，使得关键酶基因在大肠杆菌中高效催化，最终乳酰‑N‑新四糖在摇瓶中的产量达到1699mg/L，为乳酰‑N‑新四糖的高效合成和进一步的产业化奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114292324B
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202111670064.9
申请日：2021-12-30
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种共表达分子伴侣蛋白生产α‑乳白蛋白的菌株及其应用，该菌株表达了氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的人α‑乳白蛋白、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的α‑factor信号肽和分子伴侣蛋白，分子伴侣蛋白选自内质网氧化还原酶1ERO1、Atf/CREB1同源蛋白HAC1、重连结合蛋白BIP、内质网到高尔基体的转运因子ERV29、毕赤酵母二硫键异构酶PpPDI、人二硫键异构酶A1hPDIA1、人二硫键异构酶A3hPDIA3、人二硫键异构酶A4hPDIA4、人二硫键异构酶A5hPDIA5和人二硫键异构酶A6hPDIA6中的一种，优选分子伴侣人二硫键异构酶A3hPDIA3。本发明的菌株实现了α‑乳白蛋白产量的提高，摇瓶发
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