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公开(公告)号：CN118291462A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410360601.7
申请日：2024-03-27
IPC分类号： C12N15/113 , C07K14/77 , C12N15/72 , C12N1/21 , C12R1/19
摘要： 本发明涉及一种产卵清蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle 1917为出发菌株，敲除其内源质粒pMUT1，在其内源质粒pMUT2中引入中拷贝复制子p15A、乳糖操纵子和外源卵清蛋白编码基因，使用sigma因子结合位点sigma24串联PP5和Ptac启动子用于增强卵清蛋白的表达，并替换了原启动子的RBS序列，经过上述构建方法得到了一株可在无抗生素条件下生产卵清蛋白的重组大肠杆菌，结合指数补料和DO‑stat正向反馈补料策略，使卵清蛋白产量达到3.7g/L，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115851801A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211514262.0
申请日：2022-11-29
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌基因组编辑方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌作为表达宿主，将单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白整合至枯草芽孢杆菌基因组中，得到重组枯草芽孢杆菌，其中，单链DNA结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，DNA退火蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。通过在枯草芽孢杆菌基因组中整合表达单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白，可将枯草芽孢杆菌基因组整合同源臂长度缩短至35bp，为枯草芽孢杆菌内实现高效简易的基因编辑提供了工具。
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公开(公告)号：CN117778481A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311818244.6
申请日：2023-12-27
摘要： 本发明公开了一种全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌为出发菌株，构建了表达L‑亮氨酸脱氢酶L‑AAD和ɑ‑酮异己酸双加氧酶ɑ‑KICD的基因工程重组大肠杆菌，并对其融合表达方式进行优化，得到的重组菌作为全细胞催化剂，以L‑亮氨酸为底物构建全细胞催化体系用于生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸。利用本发明提供的全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸具有操作简单、成本低、效率高的特点，具有十分广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN117778217A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311822032.5
申请日：2023-12-27
IPC分类号： C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/90 , C12P7/6409 , C12R1/645
摘要： 本发明公开了一种产神经酸的解脂耶氏酵母及其构建方法和应用，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过在解脂耶氏酵母中异源表达多种3‑酮酯酰‑CoA合酶KCS，多种酯化酶，并强化表达了omega‑9去饱和酶、ATP‑柠檬酸裂解酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、乙酰辅酶A羧化酶和内质网调节因子，进一步敲除过氧化物酶体生物发生因子10基因、三酰甘油脂肪酶4基因、AMP‑蛋白激酶基因和△12去饱和酶基因，从而使神经酸的产量在摇瓶条件下达到了0.22g/L；经补料分批发酵后神经酸的产量可以达到8g/L，神经酸的占总油脂的比例达12％。本发明提供的方法为人工高效合成神经酸奠定了基础，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN115717152A
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202211514538.5
申请日：2022-11-29
摘要： 本发明公开了一种控制枯草芽孢杆菌基因组同源重组概率的方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌为出发菌株，敲除了编码RecA蛋白的基因recA或诱导表达基因recA，通过诱导物质的添加调控微生物的同源重组，使得到的工程菌株产量稳定性大大提高。
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公开(公告)号：CN116200281A
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202310040256.4
申请日：2023-01-12
申请人： 嘉兴未来食品研究院
摘要： 本发明公开了一种提高β‑胡萝卜素产量的解脂耶氏酵母菌株，在引入合成途径的基础上，通过增加crtB，crtI，crtY基因的拷贝数以及与甲羟戊酸(MVA)途径相关的基因GGS1、HMG的过表达，以及启动子的优化有效地增强了β‑胡萝卜素的产生。本发明的解脂耶氏酵母菌株在摇瓶培养物中积累了大约507.7mg/Lβ‑胡萝卜素，在5L发酵罐中获得的β‑胡萝卜素的产量达5.5g/L。
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公开(公告)号：CN117778442B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202311834611.1
申请日：2023-12-28
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/81 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N1/19 , C12R1/865
摘要： 本发明公开了一种可同时实现CRISPR激活和CRISPR干扰的表达系统及其应用，其中，表达系统包括第一表达框、第二表达框以及第三表达框，第一表达框中含有在非转录因子结合区域插入NCS序列的第一启动子，用于基因表达的激活，第二表达框中含有第二启动子以及位于基因起始密码子之后的NCS序列，用于基因表达的抑制，第三表达框中设置有dCas蛋白突变体以及用于靶向NCS序列的sgRNA。该系统可以同时靶向工程化的启动子，从而产生激活和抑制的效果，利用2个sgRNA同时产生对4个或者更多个基因的调控。
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公开(公告)号：CN118222473A
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202410458064.X
申请日：2024-04-17
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种产5’‑肌苷酸的大肠杆菌及其构建方法与应用，属于生物工程技术领域。本发明提供的产5’‑肌苷酸的大肠杆菌的构建借助CRISPR/Cas9的方法，过程包括强化前体PRPP的供应，解除磷酸核糖焦磷酸激酶受到的反馈抑制，解除谷氨酸胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶受到的反馈抑制，解除阻遏蛋白的转录抑制，下调竞争途径通量，强化前体PRPP的供应和应用，构建出的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，发酵培养48h后5’‑肌苷酸的产量达到780.66mg/L，与出发菌株相比产量提升，具有良好的工业化生产前景，实现了以葡萄糖为底物的5’‑肌苷酸稳定生产。
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公开(公告)号：CN118207147A
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202410458792.0
申请日：2024-04-17
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种高效生产5’‑肌苷酸的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。为了减少大肠杆菌中5’‑肌苷酸的降解，通过CRISPR/Cas9系统进行了四个磷酸酶编码基因的敲除验证，并发现分别敲除UMP磷酸酶编码基因nagD和5’‑核苷酸酶编码基因ushA能够提升5’‑肌苷酸产量，之后为了抑制5’‑肌苷酸进一步转化成鸟苷酸和腺苷酸，单独敲除5’‑肌苷酸脱氢酶编码基因guaB，最终为了强化嘌呤合成过程中所需的甲酰基四氢叶酸的供给和利用，替换丝氨酸羟甲基转移酶编码基因glyA的启动子为Ptac，得到的重组大肠杆菌48h发酵5’‑肌苷酸产量达到2113.12mg/L，且发酵过程不需要添加抗生素，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116790393B
公开(公告)日：2024-05-31
申请号：CN202310742722.3
申请日：2023-06-21
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种改造酿酒酵母菌以葡萄糖为底物合成活性VD3的方法，属于生物技术领域。本发明通过导入DHCR24，强化ERG1，ERG11，tHMG1，ERG7，ERG2，敲除ERG6基因，并通过导入不同的羟化酶确定最合适的维生素D3羟化酶，发现在酵母中VDH无需提供额外的电子传递链便可以发挥作用，将合成的VD3转化为25‑OH‑VD3，并且合成25‑OH‑VD3的量是suaC的5倍。在以葡萄糖为底物的发酵生产中，最终合成5.02mg/L的活性体25‑OH‑VD3，解决了现有技术中仅能以VD3作为底物转化活性体25‑OH‑VD3的问题。
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