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公开(公告)号：CN117778481A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311818244.6
申请日：2023-12-27
摘要： 本发明公开了一种全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌为出发菌株，构建了表达L‑亮氨酸脱氢酶L‑AAD和ɑ‑酮异己酸双加氧酶ɑ‑KICD的基因工程重组大肠杆菌，并对其融合表达方式进行优化，得到的重组菌作为全细胞催化剂，以L‑亮氨酸为底物构建全细胞催化体系用于生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸。利用本发明提供的全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸具有操作简单、成本低、效率高的特点，具有十分广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN117778217A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311822032.5
申请日：2023-12-27
IPC分类号： C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/90 , C12P7/6409 , C12R1/645
摘要： 本发明公开了一种产神经酸的解脂耶氏酵母及其构建方法和应用，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过在解脂耶氏酵母中异源表达多种3‑酮酯酰‑CoA合酶KCS，多种酯化酶，并强化表达了omega‑9去饱和酶、ATP‑柠檬酸裂解酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、乙酰辅酶A羧化酶和内质网调节因子，进一步敲除过氧化物酶体生物发生因子10基因、三酰甘油脂肪酶4基因、AMP‑蛋白激酶基因和△12去饱和酶基因，从而使神经酸的产量在摇瓶条件下达到了0.22g/L；经补料分批发酵后神经酸的产量可以达到8g/L，神经酸的占总油脂的比例达12％。本发明提供的方法为人工高效合成神经酸奠定了基础，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN115717152A
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202211514538.5
申请日：2022-11-29
摘要： 本发明公开了一种控制枯草芽孢杆菌基因组同源重组概率的方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌为出发菌株，敲除了编码RecA蛋白的基因recA或诱导表达基因recA，通过诱导物质的添加调控微生物的同源重组，使得到的工程菌株产量稳定性大大提高。
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公开(公告)号：CN118291462A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410360601.7
申请日：2024-03-27
IPC分类号： C12N15/113 , C07K14/77 , C12N15/72 , C12N1/21 , C12R1/19
摘要： 本发明涉及一种产卵清蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle 1917为出发菌株，敲除其内源质粒pMUT1，在其内源质粒pMUT2中引入中拷贝复制子p15A、乳糖操纵子和外源卵清蛋白编码基因，使用sigma因子结合位点sigma24串联PP5和Ptac启动子用于增强卵清蛋白的表达，并替换了原启动子的RBS序列，经过上述构建方法得到了一株可在无抗生素条件下生产卵清蛋白的重组大肠杆菌，结合指数补料和DO‑stat正向反馈补料策略，使卵清蛋白产量达到3.7g/L，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115851801A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211514262.0
申请日：2022-11-29
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌基因组编辑方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌作为表达宿主，将单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白整合至枯草芽孢杆菌基因组中，得到重组枯草芽孢杆菌，其中，单链DNA结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，DNA退火蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。通过在枯草芽孢杆菌基因组中整合表达单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白，可将枯草芽孢杆菌基因组整合同源臂长度缩短至35bp，为枯草芽孢杆菌内实现高效简易的基因编辑提供了工具。
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公开(公告)号：CN118878701A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410919458.0
申请日：2024-07-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种牛源乳铁蛋白抗菌肽改造体及其在毕赤酵母中的表达与应用，属于生物工程技术领域。本发明以牛源乳铁蛋白抗菌肽Lactoferricin为基础进行改造，改造包括将牛乳铁蛋白抗菌肽Lactoferricin与牛乳铁蛋白抗菌肽LF1‑11和Lactoferrampin融合表达，或将氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的Lactoferricin进行突变，突变位点包括第4位精氨酸、第5位精氨酸、第8位色氨酸、第9位精氨酸、第11位赖氨酸、第14位甘氨酸或其组合，并在毕赤酵母中进行重组表达，得到的抗菌肽改造体Lactoferricin‑LF1‑11‑Lactoferrampin和LFT3相较母肽Lactoferricin对金黄色葡萄球菌的抑菌活性得到了提升，有望替代抗生素成为一种安全、绿色、高效的抗菌剂，应用前景十分广阔。
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公开(公告)号：CN118440970A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410607555.6
申请日：2024-05-16
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用。本发明设计了一种基于乳糖操纵子的适用于枯草芽孢杆菌的“双筛选”生物传感器阻遏蛋白筛选基因回路：通过负筛选致死回路实现阻遏蛋白DNA结合活性筛选；通过正筛选荧光信号实现变构激活活性筛选；最终获得目标乳糖类似物识别活性的生物传感器。使用该筛选平台可获得响应乳糖、2’‑岩藻糖基乳糖、3‑岩藻糖基乳糖等物质的新型生物传感器，且经验证，本发明根据筛选结果构建的生物传感器具有较高的检测灵敏度和特异性。
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公开(公告)号：CN118440833A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410588945.3
申请日：2024-05-13
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种通过改造内质网提高卵清蛋白产量的酿酒酵母，属于基因工程技术领域。本发明在酿酒酵母CEN.PK2‑1C中异源表达卵清蛋白编码基因，并在卵清蛋白的N端上游插入INU1信号肽，以实现卵清蛋白的胞外分泌；之后使用荧光蛋白表征内质网中未折叠蛋白反应，在酿酒酵母中选用强度不同的启动子共表达分子伴侣Kar2和PDI，以促进内质网的折叠；敲除opi1基因，提高产物分泌量；过表达转录因子INO2和INO4，使内质网扩张，增加酿酒酵母的蛋白质合成能力并促进了卵清蛋白的合成。构建得到的酿酒酵母发酵生产72小时卵清蛋白的产量达到6.2mg/L。
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公开(公告)号：CN117887600B
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202410170208.1
申请日：2023-07-20
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种低乙醇合成量酿酒酵母及其在促进乙酰辅酶A合成中的应用，属于生物技术领域。本发明为降低酿酒酵母中主要的副产物乙醇的积累量，同时增加乙酰辅酶A的合成量，对MTH1、MED2和HXT2转录因子进行改造，筛选得到降低乙醇合成量的最优转录因子组合，再对整合在酿酒酵母基因组上的不同合成途径的异源的乙酰辅酶A合成途径进行比较，提供了一种重组酿酒酵母菌株。该菌株可实现以葡萄糖为碳源的无菌培养基中生长，为代谢工程改造酿酒酵母合成高价值化合物搭建了平台，且构建方法简单，便于使用，具有很好地应用前景。
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公开(公告)号：CN116970503B
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202310918227.3
申请日：2023-07-25
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N1/19 , C12N15/12 , C12N15/31 , C12N15/81 , C07K14/79 , A01N63/50 , A01N63/32 , A01P1/00 , A01P3/00 , C12R1/84
摘要： 本发明公开了一种强化囊泡转运的产乳铁蛋白毕赤酵母及促进胞外分泌的方法，属于生物技术领域。本发明发现乳铁蛋白在胞内的累积不外排，限制了胞外乳铁蛋白的产量，同时大量的乳铁蛋白聚集在胞内也会影响酵母细胞的生长，因此期望寻找一种能够有效促进其分泌表达的方法。通过筛选，发现过表达BMH2、Sec12或Sly1后胞外上清中的乳铁蛋白含量明显增加，而且沉淀破碎上清中的乳铁蛋白含量有效减少，能够强化乳铁蛋白在毕赤酵母中的囊泡转运，使其快速的分泌到细胞外，实现增强乳铁蛋白的高效表达，解决了目前乳铁蛋白聚集在胞内不分泌的问题。
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