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公开(公告)号：CN115851801A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211514262.0
申请日：2022-11-29
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌基因组编辑方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌作为表达宿主，将单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白整合至枯草芽孢杆菌基因组中，得到重组枯草芽孢杆菌，其中，单链DNA结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，DNA退火蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。通过在枯草芽孢杆菌基因组中整合表达单链DNA结合蛋白和DNA退火蛋白，可将枯草芽孢杆菌基因组整合同源臂长度缩短至35bp，为枯草芽孢杆菌内实现高效简易的基因编辑提供了工具。
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公开(公告)号：CN117778481A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311818244.6
申请日：2023-12-27
Abstract: 本发明公开了一种全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌为出发菌株，构建了表达L‑亮氨酸脱氢酶L‑AAD和ɑ‑酮异己酸双加氧酶ɑ‑KICD的基因工程重组大肠杆菌，并对其融合表达方式进行优化，得到的重组菌作为全细胞催化剂，以L‑亮氨酸为底物构建全细胞催化体系用于生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸。利用本发明提供的全细胞催化生产β‑羟基‑β‑甲基丁酸具有操作简单、成本低、效率高的特点，具有十分广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN117778217A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311822032.5
申请日：2023-12-27
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/90 , C12P7/6409 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了一种产神经酸的解脂耶氏酵母及其构建方法和应用，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过在解脂耶氏酵母中异源表达多种3‑酮酯酰‑CoA合酶KCS，多种酯化酶，并强化表达了omega‑9去饱和酶、ATP‑柠檬酸裂解酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、乙酰辅酶A羧化酶和内质网调节因子，进一步敲除过氧化物酶体生物发生因子10基因、三酰甘油脂肪酶4基因、AMP‑蛋白激酶基因和△12去饱和酶基因，从而使神经酸的产量在摇瓶条件下达到了0.22g/L；经补料分批发酵后神经酸的产量可以达到8g/L，神经酸的占总油脂的比例达12％。本发明提供的方法为人工高效合成神经酸奠定了基础，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN115717152A
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202211514538.5
申请日：2022-11-29
Abstract: 本发明公开了一种控制枯草芽孢杆菌基因组同源重组概率的方法，属于基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌为出发菌株，敲除了编码RecA蛋白的基因recA或诱导表达基因recA，通过诱导物质的添加调控微生物的同源重组，使得到的工程菌株产量稳定性大大提高。
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公开(公告)号：CN119552790A
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202411740156.3
申请日：2024-11-29
IPC: C12N1/21 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N9/12 , C12N9/88 , C12N15/31 , C07K14/21 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12P19/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明通过敲除6‑磷酸果糖激酶、甘油激酶引入甘油激酶突变体、用葡萄糖促进扩散转运蛋白替换PTS磷酸转移酶I并进行启动子优化，使重组大肠杆菌可以葡萄糖和甘油双碳源生长、合成N‑乙酰神经氨酸同时乙酸生成量极低。在此基础上，本发明又敲除了6‑磷酸果糖激酶编码基因pfkB，引入来自运动假单胞杆菌的异源ED途径，并通过拷贝数优化和RBS强度优化，使孔板水平下的产量进一步提升达到9.44g/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118291462A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410360601.7
申请日：2024-03-27
IPC: C12N15/113 , C07K14/77 , C12N15/72 , C12N1/21 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种产卵清蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle 1917为出发菌株，敲除其内源质粒pMUT1，在其内源质粒pMUT2中引入中拷贝复制子p15A、乳糖操纵子和外源卵清蛋白编码基因，使用sigma因子结合位点sigma24串联PP5和Ptac启动子用于增强卵清蛋白的表达，并替换了原启动子的RBS序列，经过上述构建方法得到了一株可在无抗生素条件下生产卵清蛋白的重组大肠杆菌，结合指数补料和DO‑stat正向反馈补料策略，使卵清蛋白产量达到3.7g/L，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115976121B
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202310084310.5
申请日：2023-02-08
Applicant: 江苏国信协联能源有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种残糖回收的膜分离黑曲霉菌体循环连续发酵生产柠檬酸的方法。本发明所述方法为：将黑曲霉种子液接入发酵培养基，发酵培养生产柠檬酸；当柠檬酸浓度达到一定浓度后，开启循环泵，利用膜组件从发酵罐连续分离出含柠檬酸的膜分离液，同时以相同速度向发酵罐内连续流加补料基质，使发酵液体积保持平衡；从膜分离液中提取柠檬酸；向剩余提取废液中加入普鲁兰酶酶解后，再加入葡萄糖，配制成葡萄糖溶液作为补料基质，重新流加至发酵罐。本发明通过膜分离技术使发酵过程产物分离和菌体截留，实现了黑曲霉菌体循环连续发酵；利用提取废液配制补料基质重新流加至发酵罐，实现了残糖回收。
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公开(公告)号：CN117946224B
公开(公告)日：2025-02-14
申请号：CN202410156909.X
申请日：2024-02-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种无膜细胞器的构建及其在调控代谢合成中的应用。通过设计八肽基本元件，构建由肽段重复串联构成的重组无序蛋白，导入表达宿主中，得到生物分子凝聚体即无膜细胞器，在枯草芽孢杆菌胞内构建了具有良好流动性、稳定性与温敏性的无膜细胞器并对其进行验证，证明构建得到的重组无序蛋白具有高度的可编程性。利用可视化实验对无膜细胞器的功能进行测试，构建得到的无膜细胞器不仅可以允许小分子化合物的扩展渗透，而且可以招募特定的靶向蛋白，能够应用于调控目标化合物代谢。
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公开(公告)号：CN118878701A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410919458.0
申请日：2024-07-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种牛源乳铁蛋白抗菌肽改造体及其在毕赤酵母中的表达与应用，属于生物工程技术领域。本发明以牛源乳铁蛋白抗菌肽Lactoferricin为基础进行改造，改造包括将牛乳铁蛋白抗菌肽Lactoferricin与牛乳铁蛋白抗菌肽LF1‑11和Lactoferrampin融合表达，或将氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的Lactoferricin进行突变，突变位点包括第4位精氨酸、第5位精氨酸、第8位色氨酸、第9位精氨酸、第11位赖氨酸、第14位甘氨酸或其组合，并在毕赤酵母中进行重组表达，得到的抗菌肽改造体Lactoferricin‑LF1‑11‑Lactoferrampin和LFT3相较母肽Lactoferricin对金黄色葡萄球菌的抑菌活性得到了提升，有望替代抗生素成为一种安全、绿色、高效的抗菌剂，应用前景十分广阔。
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公开(公告)号：CN118440970A
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202410607555.6
申请日：2024-05-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用。本发明设计了一种基于乳糖操纵子的适用于枯草芽孢杆菌的“双筛选”生物传感器阻遏蛋白筛选基因回路：通过负筛选致死回路实现阻遏蛋白DNA结合活性筛选；通过正筛选荧光信号实现变构激活活性筛选；最终获得目标乳糖类似物识别活性的生物传感器。使用该筛选平台可获得响应乳糖、2’‑岩藻糖基乳糖、3‑岩藻糖基乳糖等物质的新型生物传感器，且经验证，本发明根据筛选结果构建的生物传感器具有较高的检测灵敏度和特异性。
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