一种乳酸克鲁维基因组多位点编辑和高效筛选方法

    公开(公告)号:CN118389516A

    公开(公告)日:2024-07-26

    申请号:CN202410662454.9

    申请日:2024-05-27

    摘要: 本发明公开了一种乳酸克鲁维基因组多位点编辑和高效筛选方法,属于基因编辑技术领域。本发明提供了一种基于CRISPR/Cas9的乳酸克鲁维酵母基因编辑系统,具体地,通过对gRNA靶点进行筛选,发现在以TGG为目的基因的PAM序列设计gRNA时,总编辑效率以及同源重组编辑效率均有所提升,并进一步从供体DNA同源臂长度、供体DNA浓度、基因表达框串并联方式等方面进行同源重组编辑效率的优化。将该编辑系统用于基因组的整合表达时大大提升了该物质的表达水平,在乳酸克鲁维酵母相关研究中具有巨大潜力。

    蛋白质谷氨酰胺酶在食品级大肠杆菌中的重组表达

    公开(公告)号:CN117603899A

    公开(公告)日:2024-02-27

    申请号:CN202311762831.8

    申请日:2023-12-19

    摘要: 本发明提供了蛋白质谷氨酰胺酶在食品级大肠杆菌中的重组表达,属于发酵工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle1917为初始菌株,构建了异源表达蛋白质谷氨酰胺酶的重组菌株,对RBS和启动子进行优化和筛选,通过融合表达绿色荧光蛋白和目的基因,检测细胞荧光强度,对发酵条件进行筛选,得到最佳酶活化时间、发酵温度与IPTG添加量,在该发酵条件下,发酵12h之后,摇瓶发酵酶活可达13.5U/mL。该重组菌株可以广泛应用于蛋白质谷氨酰胺酶的生产,有利于降低蛋白质谷氨酰胺酶的生产成本,且由于大肠杆菌Nissle1917作为食品级大肠杆菌具有无毒害等优势,该重组菌株也扩大了蛋白质谷氨酰胺酶在食品领域的应用。

    一种产卵清蛋白的重组大肠杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN118291462A

    公开(公告)日:2024-07-05

    申请号:CN202410360601.7

    申请日:2024-03-27

    摘要: 本发明涉及一种产卵清蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用,属于基因工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle 1917为出发菌株,敲除其内源质粒pMUT1,在其内源质粒pMUT2中引入中拷贝复制子p15A、乳糖操纵子和外源卵清蛋白编码基因,使用sigma因子结合位点sigma24串联PP5和Ptac启动子用于增强卵清蛋白的表达,并替换了原启动子的RBS序列,经过上述构建方法得到了一株可在无抗生素条件下生产卵清蛋白的重组大肠杆菌,结合指数补料和DO‑stat正向反馈补料策略,使卵清蛋白产量达到3.7g/L,具有良好的应用前景。