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公开(公告)号:CN115960874B
公开(公告)日:2024-09-20
申请号:CN202310111425.9
申请日:2023-02-14
申请人: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc6P磷酸酶及提高GlcNAc产量的方法,具体涉及采用重组谷氨酸棒杆菌进行发酵生产,该重组谷氨酸棒杆菌过表达了如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列,该蛋白编码GlcNAc6P磷酸酶,能将GlcNAc6P去磷酸化为GlcNAc。本发明通过机器学习的方式鉴定了谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc胞内转运蛋白以及内源GlcNAc6P磷酸酶的编码基因,并根据筛选结果对菌株进行改造,显著提高了GlcNAc的产量。
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公开(公告)号:CN114574410B
公开(公告)日:2023-07-25
申请号:CN202210116458.8
申请日:2022-02-07
申请人: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要: 本发明提供了一种高效生产N‑乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌及其应用,属于生物工程技术领域。本发明所述重组大肠杆菌以大肠杆菌E.coli ATCC25947(DE3)为出发菌株,过表达具有若干个T7lac启动子控制的gna1基因与具有若干个T7lac启动子控制的glmS基因,并敲除manX基因、manY基因、manZ基因、nagA基因、nagB基因、nagE基因、poxB基因和ldhA基因所得,提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量,其浓度最高可达180g/L,葡萄糖转化率56%,不产生乙酸和乳酸副产物,为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号:CN114591881B
公开(公告)日:2023-07-21
申请号:CN202210265171.1
申请日:2022-03-17
申请人: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
IPC分类号: C12N1/21 , C12N15/55 , C12N15/75 , C12N15/31 , C12N15/113 , C12N9/80 , C12P19/26 , C12R1/125
摘要: 本发明涉及一种分泌几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其应用,通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac的表达载体pP43NMK‑D65的启动子及RBS序列进行改造,平衡菌株的生长和产物的生产,提高酶活;再通过过表达细胞壁合成蛋白EzrA,修复几丁二糖脱乙酰酶Dac在表达过程中对细胞壁的损害,实现几丁二糖脱乙酰酶Dac诱导后在发酵液中的持续性表达。与现有技术相比,本发明提供的菌株构建完成后生产性能稳定,几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活可达6404.83U/mL,具有很好的应用前景,为酶转化法实现GlcN的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号:CN112899248B
公开(公告)日:2022-10-18
申请号:CN202110077091.9
申请日:2021-01-20
申请人: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
摘要: 本发明涉及一种氨基葡萄糖‑6磷酸合成酶突变体及其应用,本发明将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的野生glmS的第39位和149位的丙氨酸突变为苏氨酸,第211位的天冬氨酸突变为天冬酰胺,第250位的精氨酸突变为半胱酰胺以及第472位的甘氨酸突变为丝氨酸得到氨基葡萄糖‑6磷酸合成酶突变体。本发明通过定点突变glmS基因,提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量,其浓度最高可达140g/L,为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组大肠杆菌构建方法简单,便于使用,具有很好的应用前景。
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公开(公告)号:CN112707955B
公开(公告)日:2022-01-18
申请号:CN202011521098.7
申请日:2020-12-21
申请人: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要: 本发明涉及一种提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的RamAM转录因子突变体,本发明提供了一种提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的RamAM转录因子突变体,并提供了过表达RamAM转录因子突变体的基因工程菌株,提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量,其浓度最高可达37.9g/L,为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单,便于使用,具有很好的应用前景。
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公开(公告)号:CN110885364B
公开(公告)日:2021-02-02
申请号:CN201911361421.6
申请日:2019-12-26
申请人: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
摘要: 本发明公开了一种促进N‑乙酰氨基葡萄糖生产的RamA转录因子突变体及其应用。本发明的突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亲本上,将90位的赖氨酸突变为天冬酰胺,以及将92位的丝氨酸突变为赖氨酸。本发明提供了一种促进N‑乙酰氨基葡萄糖生产的RamA转录因子突变体,并提供了过表达RamA转录因子突变体,能提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的基因工程菌株,通过过表达参与碳代谢调控的转录因子RamA,提高了N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量,其浓度最高可达31.5g/L,为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单,便于使用,具有很好地应用前景。
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公开(公告)号:CN112266927A
公开(公告)日:2021-01-26
申请号:CN202010962894.8
申请日:2020-09-14
申请人: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
摘要: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌GlcNAc产量的方法及一种重组枯草芽孢杆菌,属于基因工程技术领域。本发明以枯草芽孢杆菌作为出发菌株,通过基于Gibson组装技术,以强组成型启动子P43调控二氢脂酰胺乙酰转移酶编码基因acoC表达,从而能够提高枯草芽孢杆菌中乙酰氨基葡萄糖产量,重组枯草芽孢杆菌BP18‑GNA1‑acoC的乙酰氨基葡萄糖产量达到26.8g·L‑1,较对照菌BP18‑GNA1(24.5g·L‑1)提高9.4%。本发明加强乙酰氨基葡萄糖合成途径,为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组枯草芽孢杆菌构建方法简单,便于使用,具有良好的应用前景。
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公开(公告)号:CN111019875A
公开(公告)日:2020-04-17
申请号:CN201911358364.6
申请日:2019-12-25
申请人: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
摘要: 本发明涉及一种生产N-乙酰氨基葡萄糖的重组谷氨酸棒杆菌及其应用,属于代谢工程领域。该重组谷氨酸棒杆菌通过在谷氨酸棒杆菌中过表达自身来源的转录因子SugR得到。本发明的重组谷氨酸棒杆菌提高了乙酰氨基葡萄糖的产量,产量达到26g/L,为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号:CN110885364A
公开(公告)日:2020-03-17
申请号:CN201911361421.6
申请日:2019-12-26
申请人: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
摘要: 本发明公开了一种促进N-乙酰氨基葡萄糖生产的RamA转录因子突变体及其应用。本发明的突变体是在氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的亲本上,将90位的赖氨酸突变为天冬酰胺,以及将92位的丝氨酸突变为赖氨酸。本发明提供了一种促进N-乙酰氨基葡萄糖生产的RamA转录因子突变体,并提供了过表达RamA转录因子突变体,能提高N-乙酰氨基葡萄糖产量的基因工程菌株,通过过表达参与碳代谢调控的转录因子RamA,提高了N-乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量,其浓度最高可达31.5g/L,为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。本发明提供的重组谷氨酸棒杆菌构建方法简单,便于使用,具有很好地应用前景。
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公开(公告)号:CN117645985A
公开(公告)日:2024-03-05
申请号:CN202311593867.8
申请日:2023-11-27
申请人: 山东润德生物科技有限公司 , 江南大学
摘要: 本发明公开了一种乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶突变体及其应用,属于生物技术领域。本发明以来源于多形拟杆菌Bacteroides thetaiotaomicron VPI‑5482的乙酰氨基葡萄糖‑6磷酸磷酸酶为出发序列,通过突变位点的筛选及验证,发现了一种能够提高此酶的底物专一性和催化活力的突变体,将该突变体引入基因工程大肠杆菌中后进行发酵验证,发现N‑乙酰氨基葡萄糖在胞外的积累量最高可达224g/L,与转化突变前pET28a‑BT4131的对照菌株相比,发酵液中乙酰氨基葡萄糖浓度提高了49.3%,在工业生产上具有十分广阔的应用前景。
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