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公开(公告)号：CN115772533A
公开(公告)日：2023-03-10
申请号：CN202211021222.2
申请日：2022-08-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种细菌连续进化系统、正交易错DNA聚合酶及连续进化方法。本发明将正交DNA复制系统与正交易错DNA聚合酶结合后，获得了一种能够包含所有突变类型、可实现长DNA片段突变、连续性好和操作简便的连续进化方法。通过诱导DNA聚合酶表达的开启与关闭，实现线性质粒易错突变过程与高保真复制过程的切换，从而实现靶DNA序列的高效连续进化。
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公开(公告)号：CN111304234A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN202010124554.8
申请日：2020-02-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于枯草芽孢杆菌的非天然氨基酸利用工具，属于基因工程领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为表达宿主，通过在胞内表达特定tRNA和相应的特异性识别非天然氨基酸的氨酰tRNA合成酶，使枯草芽孢杆菌能够利用非天然氨基酸翻译终止密码子TAG。同时，通过调节非天然氨基酸浓度，使枯草芽孢杆菌内形成了一个严密的蛋白表达开关，达到定向调控基因表达强度或蛋白表达量的效果。本发明为枯草芽孢杆菌表达带有非天然氨基酸的高活性酶，降低工程菌逃逸概率等方面的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN119876077A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202411890789.2
申请日：2024-12-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种合成单链DNA的T7RNA聚合酶突变体及其筛选方法与应用，属于酶工程技术领域。本发明提供了一种T7RNA聚合酶突变体的定向进化和筛选的方法，首先在底盘菌株基因组中敲除核酸外切酶和错配修复蛋白，敲入单链退火蛋白、含有缺失突变的抗性基因和单链DNA合成模板，构建得到用于筛选的基因工程菌，之后构建T7RNA聚合酶突变体文库，将带有突变体文库的重组质粒转入工程菌中，T7RNA聚合酶突变体合成单链DNA修复抗性基因的缺失突变，使转化后的工程菌能够在抗性平板上生长，经过多轮筛选得到的T7RNA聚合酶突变体经体外验证能够高效合成单链DNA，为单链DNA的合成提供了一种全新的工具，具有应用于基因编辑和进化工程等领域的潜力。
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公开(公告)号：CN114891712B
公开(公告)日：2023-09-12
申请号：CN202210690425.4
申请日：2022-06-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/31 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/55 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12P19/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种提高N‑乙酰神经氨酸产量的重组大肠杆菌及其构建方法，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过构建具有N‑乙酰神经氨酸合成能力的重组菌株BL21(DE3)ΔnanATEK,ΔnagABE,ΔmanXYZ::PgprE‑NeuC,ΔpoxB，并在基因组上重组表达由低强度组成型启动子PgrpE调控的glmM，由中等强度组成型启动子PssrA调控的glmU和glmS突变体glmSA，并用低强度组成型启动子PgrpE调控脑膜炎奈瑟菌来源的NemNeuB的表达，获得了N‑乙酰神经氨酸产量提高的重组菌株，使产量达到11.28g/L，为工业化生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111321163B
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202010125125.2
申请日：2020-02-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌线性质粒系统的构建与应用，属于枯草芽孢杆菌基因工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为表达宿主，通过在枯草芽孢杆菌内表达来源于枯草芽孢杆菌噬菌体phi29的基因组复制相关基因簇，从而实现线性质粒在胞内的复制与表达。通过更换不同的启动子，可以控制线性质粒的拷贝数与表达水平。经验证，应用该线性质粒系统表达绿色荧光蛋白，在摇瓶培养70h后未发生质粒丢失的情况，这种新型的表达工具为实现枯草芽孢杆菌高效稳定的基因表达，基因编辑，代谢工程改造等奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109385440A
公开(公告)日：2019-02-26
申请号：CN201811241708.0
申请日：2018-10-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种调控枯草芽孢杆菌中目的蛋白表达的方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为表达宿主，通过在目的蛋白N端编码基因前添加通过特定方法设计的氨基酸序列，并在质粒中游离表达，使重组枯草芽孢杆菌目的蛋白表达量提高至改造前的397倍，降低至改造前的1.94％。这为枯草芽孢杆菌基因蛋白高效表达和基因工程改造奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116004692A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202210909397.0
申请日：2022-07-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备方法及转化方法，属于基因工程技术领域。通过使用木糖诱导型启动子PxylA在基因组上过表达一个额外拷贝的comK基因获得一株转化效率提高的重组枯草芽孢杆菌，再通过对培养基种类、种子液培养时间、外源DNA添加用量、感受态中甘油添加量的优化，建立了一种高效、便捷的DNA转化方法。
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公开(公告)号：CN113481139B
公开(公告)日：2022-11-08
申请号：CN202110867868.1
申请日：2021-07-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产胍基乙酸的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法，属于枯草芽孢杆菌代谢工程和基因工程技术领域。本发明得到的重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是由野生型枯草芽孢杆菌为出发菌株，通过在枯草基因组上引入外源的精氨酸：甘氨酸脒基转移酶而得到的一株高产胍基乙酸的重组菌株，其产量达到12.8g/L，第一次实现在枯草芽孢杆菌中进行胍基乙酸的合成。这为枯草芽孢杆菌代谢工程高效生产胍基乙酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114891712A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210690425.4
申请日：2022-06-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/31 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/55 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12P19/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种提高N‑乙酰神经氨酸产量的重组大肠杆菌及其构建方法，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明通过构建具有N‑乙酰神经氨酸合成能力的重组菌株BL21(DE3)ΔnanATEK,ΔnagABE,ΔmanXYZ::PgprE‑NeuC,ΔpoxB，并在基因组上重组表达由低强度组成型启动子PgrpE调控的glmM，由中等强度组成型启动子PssrA调控的glmU和glmS突变体glmSA，并用低强度组成型启动子PgrpE调控脑膜炎奈瑟菌来源的NemNeuB的表达，获得了N‑乙酰神经氨酸产量提高的重组菌株，使产量达到11.28g/L，为工业化生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114874967A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210690512.X
申请日：2022-06-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/55 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/61 , C12N15/53 , C12N15/56 , C12N15/31 , C12P19/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种产N‑乙酰神经氨酸的重组大肠杆菌及其构建方法，属于代谢工程和基因工程技术领域。本发明构建的重组大肠杆菌(Escherichia coli)是由大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，通过在基因组上敲除nanATEK基因,nagABE基因、manXYZ基因、poxB基因，并引入外源的UDP‑N‑乙酰氨基葡糖‑2‑差向异构酶编码基因NeuC和N‑乙酰神经氨酸合酶编码基因NeuB，并且重组表达由诱导型启动子T7调控的内源酶glmM，glmU和glmS突变体glmSA而得到的一株产N‑乙酰神经氨酸的重组菌株，其产量达到3.85g/L，为工业化生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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