本发明公开了一株产L‑乳酸的酿酒酵母的改造及其应用，属于定向代谢技术领域。本发明以酿酒酵母TJG12作为出发菌株，通过敲除酿酒酵母TJG12中的NADH脱氢酶NDE1和NDE2以及苹果酸脱氢酶1，并增强了苹果酸脱氢酶2的表达，同时异源表达来源于大肠杆菌的6‑磷酸果糖激酶pfkA及来源于乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶LLDH等改造，提升了酿酒酵母对L‑乳酸的生产性能，可使摇瓶产量从29.5g/L提升至47.7g/L。有利于进一步提升L‑乳酸的生产性能。