公开(公告)号：CN107741495A

公开(公告)日：2018-02-27

申请号：CN201710771922.6

申请日：2017-08-31

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  田宏 ,  杨帆 ,  石正旺 ,  刘华南 ,  张克山 ,  朱紫祥 ,  李丹 ,  刘永杰 ,  何继军 ,  郭建宏 ,  蒋韬 ,  刘湘涛

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/535

CPC classification number: G01N33/56983 ,  G01N33/535 ,  G01N2333/08

Abstract: 本发明公开了一种用于塞内卡病毒抗原检测的双抗夹心ELISA试剂盒及其应用。所述的试剂盒包括塞内卡病毒豚鼠抗IgG包被的酶标板以及HRP标记的塞内卡病毒兔抗IgG。本发明使用HRP标记兔抗IgG，替代传统ELISA中的一抗和二抗，简化了操作步骤。同时通过改变包被稳定工艺将SVV豚鼠抗IgG包被到固相载体表面，改变了酶标抗体稀释液的配制工艺，可使酶标抗体工作液稳定保存而不改变其活性和效价，建立了特异检测SVV抗原的双抗夹心ELISA试剂盒及其检测方法。本发明的提出弥补了SVV ELISA抗原检测的空缺，克服了现有病毒分离检测SVV抗原重复性和敏感性低、操作程序繁琐的问题，为SVV抗原检测提供了一种有效的技术手段。

公开(公告)号：CN107304419A

公开(公告)日：2017-10-31

申请号：CN201610255084.2

申请日：2016-04-22

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 田宏 ,  吴锦艳 ,  林彤 ,  陈妍 ,  尚佑军 ,  张克山 ,  郑海学 ,  王光祥 ,  刘湘涛

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/81 ,  C40B50/06 ,  C40B40/02 ,  C07K16/10

CPC classification number: C12N15/1096 ,  C07K16/1081 ,  C07K2317/569 ,  C12N15/81 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种抗猪瘟病毒VHH抗体的酵母cDNA文库及其构建方法和用途，本发明从猪瘟C株弱毒疫苗免疫的骆驼的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT-PCR的方法得到抗猪瘟病毒VHH抗体的cDNA片段，将VHH抗体的cDNA片段与pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞，得到抗猪瘟病毒VHH抗体的酵母cDNA文库。对所构建的酵母cDNA文库的容量及多态性进行了鉴定，结果表明该文库的滴度约为5.5×106cfu/ml，且多样性好，文库的重组率为100％。采用血凝抑制试验对抗猪瘟病毒VHH抗体的酵母cDNA文库进行初步功能性鉴定，表明所构建的酵母文库中存在具有中和活性的抗猪瘟病毒VHH抗体。本发明的提出为筛选抗猪瘟病毒VHH抗体提供了平台，并且为猪瘟的早期治疗和诊断提供了新的技术手段。

公开(公告)号：CN106148568A

公开(公告)日：2016-11-23

申请号：CN201610536974.0

申请日：2016-07-08

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 ,  内蒙古河套农牧业技术研究院

Inventor： 尚佑军 ,  张志东 ,  陈妍 ,  吴锦艳 ,  王光祥 ,  刘湘涛 ,  尹双辉 ,  田宏 ,  杨顺利 ,  刘永杰 ,  张克山 ,  栾志舫

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种免疫磁珠试剂盒及其在检测小反刍兽疫病毒抗原中的用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV N蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。

公开(公告)号：CN105821480A

公开(公告)日：2016-08-03

申请号：CN201610288469.9

申请日：2016-05-03

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 田宏 ,  吴锦艳 ,  林彤 ,  陈妍 ,  尚佑军 ,  郑海学 ,  张克山 ,  刘湘涛

IPC: C40B40/08 ,  C40B50/06

CPC classification number: C40B40/08 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种抗羊口疮病毒的双峰驼VHH重链单域抗体cDNA文库及其制备方法。其文库包含羊口疮疫苗免疫骆驼的抗原剂量、免疫程序和血清抗体效价，制备文库包括以下步骤：骆驼外周血淋巴细胞分离、总RNA提取及mRNA分离、纯化；CDSⅢ和SMART引物逆转录合成全长cDNA，设计两套扩增引物，采用同源重组的方法将扩增产物与pGADT7共转染酵母细胞Y187；构建骆驼抗羊口疮病毒的VHH基因cDNA文库；计算文库库容量；扩增cDNA文库进行质量评价。本发明针对羊口疮病毒构建的cDNA文库是一种具备病毒特异性、生物学活性好、结合抗原能力强、具有潜在中和功能的抗体文库，尤其是单域抗体之类的新型抗体，对于建立羊口疮病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理具有极其重要的作用。

公开(公告)号：CN102660545A

公开(公告)日：2012-09-12

申请号：CN201210180401.0

申请日：2012-06-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 刘湘涛 ,  吴锦艳 ,  田宏 ,  陈妍 ,  尚佑军 ,  尹双辉 ,  王光祥 ,  靳野 ,  张克山 ,  杨顺利 ,  刘永杰

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/867 ,  C12N7/04 ,  C12N5/07 ,  C12N15/10

Abstract: 一种用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的RNAi及其制备方法，所述包含siRNA序列、shRNA慢病毒表达载体构建、复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染Marc-145细胞（绿猴肾细胞）以及抑制PRRSV复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制PRRSV在敏感细胞上复制的作用。本发明对猪瘟病毒体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向猪瘟病毒基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒的siRNA的转基因动物。为RNAi应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因功能研究以及猪瘟的防治积累了必要的实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。

公开(公告)号：CN102440997A

公开(公告)日：2012-05-09

申请号：CN201110382854.7

申请日：2011-11-25

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 张克山 ,  刘湘涛 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  尹双辉 ,  逯忠新

IPC: A61K31/7056 ,  A61K31/546 ,  A61P1/02 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明公开了一种治疗羊口疮的药物，每毫升药物中含有0.025～0.028g的利巴韦林、0.0035～0.004g的头孢噻呋钠、体积浓度为2％～2.5％的甘油以及余量的生理盐水。该药物可快速抑制口疮病毒的复制，可防止口疮溃疡面继发细菌感染，不易挥发，且药物成分的药源充分，价格低廉，使用方便，治疗效果好，治愈率可达75％，羔羊死亡率下降5％，病情好转率为90％，且对养殖人员无害。

公开(公告)号：CN117467617B

公开(公告)日：2024-08-09

申请号：CN202311360016.9

申请日：2023-10-20

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 张克山 ,  郑海学 ,  陈玲玲 ,  田宏 ,  朱紫祥 ,  杨帆 ,  曹伟军 ,  马旭升 ,  茹毅 ,  冯涛 ,  郭建宏

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N15/87 ,  A61K35/22 ,  A61K31/7105 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种敲除vimentin基因的MA‑104细胞系MA‑104‑KO‑vimentin及其构建方法和应用。细胞系MA‑104‑KO‑vimentin的保藏编号为CCTCC:C2023142或CCTCC:C2023229。细胞系MA‑104‑KO‑vimentin的构建方法，包括：（1）gRNA设计。（2）将gRNA通过瞬时转染到细胞中，通过CAT Tool分析切割效率，选择切割效率最高的gRNA用于生产KO细胞系。（3）单克隆细胞培养。（4）单克隆细胞筛选。本发明利用CRISPR‑Cas9系统构建了稳敲除vimentin基因的MA‑104细胞系。

公开(公告)号：CN116236568B

公开(公告)日：2024-07-23

申请号：CN202310138735.X

申请日：2023-01-30

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  马旭升 ,  尚小粉 ,  辇晓峰 ,  李茜 ,  朱紫祥 ,  茹毅 ,  罗志宽 ,  杨帆 ,  张克山 ,  田宏 ,  代军飞 ,  冯涛 ,  王琦 ,  曹伟军 ,  党文 ,  唐静

IPC: A61K39/39 ,  C12N15/867 ,  A01K67/0278 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  A61P29/00

Abstract: 本发明属于病毒免疫学领域，尤其是涉及非洲猪瘟病毒C717R蛋白作为免疫诱导剂或者佐剂的应用。具体如：ASFV C717R蛋白可作为免疫应答诱导剂或佐剂进行应用；ASFV C717R蛋白还可以作为炎症应答的激活剂进行应用。本发明将ASFV C717R重组慢病毒感染小鼠后，发现小鼠血清和动物组织的炎性细胞因子产生且分泌上调。本发明为为ASFV的防控以及C717R蛋白可以作为佐剂激活炎症反应提供了新的支持。

公开(公告)号：CN116445486B

公开(公告)日：2023-12-05

申请号：CN202310322418.3

申请日：2023-03-29

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  冉乾东 ,  杨帆 ,  张伟 ,  曹伟军 ,  朱紫祥 ,  范仲鑫 ,  田宏 ,  张克山 ,  何继军 ,  郭建宏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N7/00 ,  C12N5/10 ,  A61K39/135 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14 ,  C12R1/91 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及KLHL34敲除细胞系的构建及作为小RNA病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中KLHL34基因表达能促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向KLHL34的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向KLHL34基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了KLHL34基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV

公开(公告)号：CN114058619B

公开(公告)日：2023-11-14

申请号：CN202111392731.1

申请日：2021-11-19

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  朱紫祥 ,  张向乐 ,  曹伟军 ,  杨帆 ,  唐闻达 ,  李攀 ,  齐晓兰 ,  顾峰幸 ,  陈文哲 ,  张克山 ,  刘湘涛

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10 ,  A61K39/125 ,  A61K39/135 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及RIPLET敲除细胞系的构建及作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中RIPLET基因表达能促进小核糖核酸病毒科病毒，尤其是口蹄疫病毒和塞内卡病毒的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向RIPLET的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向RIPLET基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了RIPLET基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小核糖核酸病毒科病毒，尤其是口蹄疫病毒和塞内卡病毒的复制，提高小核糖核酸病毒科病毒疫苗的生产量和抗原表达量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。