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公开(公告)号：CN113174407A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110506452.7
申请日：2021-05-10
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达猪瘟病毒完整结构蛋白CHO‑K1细胞系的筛选方法，主要是利用PCR方法扩增猪瘟病毒(石门株)的完整结构蛋白(ShmEs)基因，并将其插入真核表达载体pcDNA3.4中，构建重组表达质粒pcDNA3.4‑ShmEs。利用瞬时转染的方法将该重组质粒转入CHO‑K1细胞，并使用抗生素G418进行筛选。试验结果表明，ShmEs基因在CHO‑K1细胞中得到了表达且能够稳定传代表达，并且利用该稳定细胞系生产的抗原免疫兔体能够刺激兔体产生猪瘟特异性抗体，并且能够至少维持42天。ShmEs基因的成功表达及其稳定细胞系的建立为猪瘟新型基因重组疫苗的开发奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109438574B
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN201811341946.9
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.4。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN106086240B
公开(公告)日：2019-12-13
申请号：CN201610536967.0
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804
Abstract: 本发明公开了一种用于检测小反刍兽疫病毒抗原的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV F蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105504053B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201510985596.X
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN107860919A
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201711011298.6
申请日：2017-10-26
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 杨顺利
IPC: G01N33/569
CPC classification number: G01N33/56983
Abstract: 一种检测猪圆环病毒2型IgM抗体的ELISA试剂盒，包括有：抗原包被微孔板，HRP标记的指示抗原，标准阳性和标准阴性对照血清，底物，洗涤液和终止液；其中抗原包被微孔板，是通过构建串联表位蛋白，用大肠杆菌(E.coli)重组表达，筛选到高亲和活性和特异性的串联表位蛋白CapEpi Ⅱ和CapEpi Ⅳ，将CapEpi Ⅱ作为IgM捕获抗原，以37.5ng/mL的浓度，4℃过夜包被96孔微孔板而得到；HRP标记的指示抗原，是利用HRP标记CapEpi Ⅳ，并通过已知IgM阳性血清滴定其最佳工作浓度，来作为IgM指示抗原。本发明具有较好的敏感性和特异性，无需对待检血清稀释，操作简单，适用于田间大量样品的快速检测；可有效检测PCV2感染后IgM的产生。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105504053A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201510985596.X
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C07K16/10
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN103276111B
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201310200393.6
申请日：2013-05-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种用于检测羊痘病毒的检测方法，通过设计一对引物和一条探针对样品的DNA模板进行实时荧光定量PCR检测；本发明还提供了用上述检测方法检测羊痘病毒的试剂盒。本发明用来检测羊痘病毒的试剂盒设计了针对P32的2条特异引物及1条探针，进行羊痘病毒Taqman实时定量PCR检测，针对该基因建立的实时定量方法特异性高，稳定性好；本发明用来检测羊痘病毒的试剂盒，操作简便，用户只需将待检样品的DNA加入反应管中，根据扩增曲线即可得出检测结果，省时省力，成本较低，时间由原来的3-4小时缩短到1-2小时；并且比普通PCR的灵敏度高，可用于检测低微含量的羊痘病毒。
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公开(公告)号：CN102981000B
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201210471119.8
申请日：2012-11-20
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68
Abstract: 一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，包括以下步骤：(1)设计针对羊痘病毒主要免疫基因P32的短肽；(2)常规合成肽技术合成肽段；(3)基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒；(4)优化条件，最终制备出检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒。本发明包被用抗原属于体外人工合成的免疫肽片段，减少了使用全病毒的危险性，避免病毒的扩散和逃逸。合成肽纯度高，免疫学特性与羊痘病毒粒子相似，可替代羊痘病毒粒子作为检测用抗原，从而制备出敏感、特异、安全和可靠的羊痘病毒血清抗体检测试剂盒。
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公开(公告)号：CN103467599A
公开(公告)日：2013-12-25
申请号：CN201310448137.9
申请日：2013-09-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N15/63 , C12N1/21 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH和用途，以解决现有猪瘟病毒抗原诊断试剂研发过程中存在的无法获得高纯度、高亲和力的抗猪瘟病毒抗体的生产和制备的问题。一种双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH，所述的抗体具有核苷酸序列：SEQIDNO.1，SEQIDNO.2或SEQIDNO.3。所述的双峰驼源抗猪瘟兔化弱毒疫苗株E2抗原重链抗体VHH在制备检测猪瘟病毒抗原诊断试剂中的应用。本发明的发明特点是首次获得利用双峰驼筛选获得抗猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株抗原蛋白E2的VHH抗体编码序列；ELISA实验结果表明，E.coli中表达的重组VHH抗体与猪瘟病毒多克隆抗血清具有相同的抗原结合能力，可代替猪瘟病毒多克隆抗体用于猪瘟病毒抗原诊断试剂的研究中。
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公开(公告)号：CN103305637A
公开(公告)日：2013-09-18
申请号：CN201310268535.2
申请日：2013-06-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测PRRSV的Taqman Real-timeRT-PCR试剂盒，包含OneStepRT-PCRbufferIII、ExTaqHS、PrimerScriptRTEnzymeMixII、阴性对照、阳性对照、以及序列SEQIDNO:1至SEQIDNO:2的扩增引物及SEQIDNO:3的探针引物的混合物。本发明将反转录和PCR扩增过程在一步反应中完成，检测时间缩短，无需电泳就可直观反应检测结果，从而有利于快速检测；同时闭管操作可以有效防止反应产物的污染。本发明使用了探针法，只有当探针特异的结合到扩增靶序列上时才会产生有效的结果，具有更高的准确性，有助于PRRSV的防控和隐性带毒动物的剔除。
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