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公开(公告)号：CN114924069A
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN202210524481.0
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , C12Q1/6804 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑2免疫磁珠的直扩检测山羊痘病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的山羊痘病毒单域抗体9‑4‑2通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑2免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑2蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集山羊痘病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了山羊痘病毒由于形成夹皮时间久，不容易在病毒复制高峰期发现，采集病料病毒含量低微，所以检出率低，容易漏检等现象；以及提取基因组DNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，而且高效、灵敏、特异、稳定、实用，本发明的提出为山羊痘病毒病的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN113215084A
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN202110656119.4
申请日：2021-06-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种羊胎儿皮肤成纤维细胞、其分离方法与应用，其中，所述成纤维细胞的保藏号为CCTCC No：C2019202。本发明在羊胎儿皮肤成纤维细胞SFSFS的分离过程中分别采用含0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA的消化液以及Ⅳ型胶原酶处理羊胎儿皮肤组织，然后用含0.01‑0.05%胰蛋白酶‑EDTA消化液处理细胞；并采用3%胎牛血清+10‑40ng/ml的h‑EGF替代10%的胎牛血清培养羊胎儿皮肤成纤维细胞，使胎牛血清使用量大大减少，降低了SFSFS培养成本和羊口疮病毒生产成本，节约了资源。本发明的细胞株能够明显提高羊口疮病毒的分离率、缩短分离时间，且分离的羊口疮病毒毒价和病毒拷贝数也更高，可以为羊口疮病毒的规模化繁殖及病毒感染致病机制研究提供工具。
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公开(公告)号：CN106148568B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201610536974.0
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , G01N33/569 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种免疫磁珠试剂盒及其在检测小反刍兽疫病毒抗原中的用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV N蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN110373501A
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201910712611.1
申请日：2019-08-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于免疫磁球的猪流行性腹泻病毒快速检测试剂盒，属于生物领域，该试剂盒包括有：免疫磁球，洗涤液，无菌无核酶水，标准阳性对照样品，检测引物，Real time RT-PCR反应液；其中的免疫磁球表面具有PEDV膜蛋白特异性多克隆抗体。本发明利用表面（羧基化）修饰的磁球和抗PEDV膜蛋白M特异性兔源多克隆抗体制备了免疫磁球，能够特异性结合粪便、组织等多种样品中的PEDV病原，以免疫磁球-病原复合物直接作为模板，进行Real time RT-PCR检测，简化了实验操作步骤并节省了检测时间。
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公开(公告)号：CN107064488B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201710303456.9
申请日：2017-05-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/531 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种猪瘟病毒血清总抗体固相阻断ELISA试剂盒所用抗原的制备方法，属于生物领域，方法是将CSFV疫苗株C‑株细胞培养抗原灭活、浓缩、不同截留分子量层析柱纯化全抗原，稳定包被酶标板作为检测抗原，结合辣根过氧化物酶标记羊抗CSFV高免血清抗体作为阻断抗体，TMB底物和终止液的联合使用，使用完整CSFV粒子作为抗原用于检测抗猪瘟病毒血清总抗体的固相阻断ELISA检测方法。可以系统、真实、完整描述猪瘟疫苗免疫过程中抗体产生的特征规律，对猪瘟疫苗接种和防疫具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109438573A
公开(公告)日：2019-03-08
申请号：CN201811341154.1
申请日：2015-12-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒M蛋白特异性重链抗体，编码所述抗体的核苷酸序列为：SEQ ID NO.8。本发明的效果在于：利用噬菌体展示技术构建PEDV M蛋白双峰驼源免疫文库，筛选获得8株来自双峰驼IgG重链抗体高变区抗M蛋白VHH抗体基因编码序列，对其进行可溶性表达和ELISA实验证明其均可以同M蛋白相结合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白结合能力各有差异。8株VHH抗体可通过E.coli的表达，而制备体外重组的基因工程抗体。
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公开(公告)号：CN108676792A
公开(公告)日：2018-10-19
申请号：CN201810501728.0
申请日：2018-05-23
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种基于驼源抗PPRV cDNA文库及其制备方法和应用，属于生物技术领域。其利用PPRV弱毒苗及浓缩、纯化弱毒苗制备抗原免疫骆驼，获得高质量免疫血清及全血；利用两端分别带有SfiIA、SfiIB酶切位点引物逆转录外周血淋巴细胞提取的总mRNA，合成全长cDNA第一链，PCR扩增，SfiI单酶切后定向插入特定载体 pGADT7‑SfiI，获得基于驼源抗小反刍兽疫病毒抗体cDNA文库。经鉴定：文库库容>约2.0×106cfu/mL，插入片段约400bp～2kbp，平均长度约1Kbp，多样性好，重组率约100%；功能性分析表明：所构建的cDNA文库中存在具有中和活性抗小反刍兽疫病毒VHH抗体。本发明的提出为筛选抗小反刍兽疫病毒VHH抗体提供了平台，为小反刍兽疫的早期治疗和诊断提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN105968176A
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201610225924.0
申请日：2016-04-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/23 , A61K39/10 , A61P31/04 , G01N33/68 , G01N33/569
CPC classification number: C07K14/23 , A61K39/00 , G01N33/56911 , G01N33/68 , G01N2333/23
Abstract: 本发明公开一种布鲁氏菌L7/L12蛋白抗原表位多肽及其应用。本发明的多肽是：其氨基酸序列中含有SEQ ID N0.1，或SEQ ID N0.1所示的序列经过一个或/和几个氨基酸残基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽，也可以是氨基酸序列为SEQ ID N0.1所示的序列和添加有具有布鲁氏菌免疫源性功能的衍生的多肽。本发明的SEQ ID N0.1多肽可以构成的重组载体或表达盒或转基因细胞或重组菌。而本发明所涉及的各多肽可在制备诊断或预防或治疗布鲁氏菌引起的疾病的试剂或药物中的应用。本发明筛选多肽为化学合成，经刺激DC后可释放出高浓度的IL‑4，可作为目的抗原检测检测布鲁氏菌病感染的血清，或制备L7/L12蛋白单克隆抗体的抗原。
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公开(公告)号：CN105887208A
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201610281583.9
申请日：2016-05-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗羊痘病毒双峰驼VHH重链单域抗体cDNA文库及其制备方法，属于生物技术领域。单域抗体酵母cDNA文库包含羊痘弱毒苗免疫骆驼的抗原剂量、免疫程序和血清抗体效价；其制备方法包括：骆驼淋巴细胞分离、总RNA提取及mRNA分离、纯化；CDSⅢ和SMART引物逆转录合成全长cDNA；设计两套扩增引物，采用同源重组的方法将扩增产物与pGADT7共转染酵母细胞Y187；构建骆驼抗羊痘病毒的VHH基因cDNA文库；计算文库库容量；扩增cDNA文库进行质量评价等步骤。本发明提供了一种具备相对分子质量小、稳定性强、可溶性好、抗原结合性能好、易表达等优势的抗羊痘病毒的双峰驼VHH重链单域抗体酵母cDNA文库及其制备方法。
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公开(公告)号：CN104388594B
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201410745729.1
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种用于检测猪伪狂犬病毒的Taqman Real-time PCR试剂盒，包含扩增预混液、阴性对照、阳性对照以及序列SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:2的扩增引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物。本发明利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析，计算待检样品拷贝数，结果更为准确直观，省时省力，成本较低，时间由原来的3～4小时缩短到1～2小时；并且比普通PCR的灵敏度高，可用于检测低微含量的猪伪狂犬病毒样品；适用于科研单位定量分析；而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有较好的应用前景。
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