公开(公告)号：CN109266614A

公开(公告)日：2019-01-25

申请号：CN201810942657.8

申请日：2018-08-17

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 吴锦艳 ,  田宏 ,  尚佑军 ,  曹小安 ,  惠小婷 ,  刘湘涛 ,  刘永生

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867

Abstract: 本发明提供一种基于小反刍兽疫病毒受体的细胞BHK/slam，其保藏号为：CCTCC NO:C201895，该细胞表达的小反刍兽疫病毒受体-山羊淋巴细胞信号活化因子完整ORF具有明显增强小反刍兽疫病毒复制的功能，该细胞通过过量表达小反刍兽疫病毒特定细胞受体缩短了致细胞病变后的收毒时间（从4-7d缩短到3-4d），提高了小反刍兽疫病毒毒价（ct值从20.66提高到16.91），同体积病毒拷贝数也得到了大幅度增加（拷贝数从4.1X107提高到5.3X108），同时节约了成本。为小反刍兽疫病毒分离及疫苗毒生产提供了良好工具，也为小反刍兽疫病毒致病机制研究提供细胞模型。本发明还提供了该细胞的制备及应用。

公开(公告)号：CN108676792A

公开(公告)日：2018-10-19

申请号：CN201810501728.0

申请日：2018-05-23

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 吴锦艳 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  曹小安 ,  惠小婷 ,  李玲霞 ,  关玉华 ,  刘湘涛 ,  刘永生

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/13 ,  C40B50/06 ,  C40B40/02

Abstract: 本发明公开了一种基于驼源抗PPRV cDNA文库及其制备方法和应用，属于生物技术领域。其利用PPRV弱毒苗及浓缩、纯化弱毒苗制备抗原免疫骆驼，获得高质量免疫血清及全血；利用两端分别带有SfiIA、SfiIB酶切位点引物逆转录外周血淋巴细胞提取的总mRNA，合成全长cDNA第一链，PCR扩增，SfiI单酶切后定向插入特定载体 pGADT7‑SfiI，获得基于驼源抗小反刍兽疫病毒抗体cDNA文库。经鉴定：文库库容>约2.0×106cfu/mL，插入片段约400bp～2kbp，平均长度约1Kbp，多样性好，重组率约100%；功能性分析表明：所构建的cDNA文库中存在具有中和活性抗小反刍兽疫病毒VHH抗体。本发明的提出为筛选抗小反刍兽疫病毒VHH抗体提供了平台，为小反刍兽疫的早期治疗和诊断提供了新的技术手段。

公开(公告)号：CN108912225B

公开(公告)日：2020-06-09

申请号：CN201810843478.9

申请日：2018-07-27

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 吴锦艳 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  曹小安 ,  惠小婷 ,  关玉华 ,  王耀杰 ,  刘湘涛 ,  刘永生

IPC: C07K16/08 ,  C07K1/34 ,  G01N33/535 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供了一种基于双峰驼抗羊痘病毒VHH‑4‑1及用途，属于生物技术领域，包含抗山羊痘病毒VHH‑4‑1，VHH‑4‑1的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明提供的试剂盒由于使用了功能化标记的VHH‑4‑1，避免了一抗、二抗以及抗抗体等步骤，提高了灵敏性、稳定性，缩短了时间，节约了资源。突破了传统Elisa方法费时、费力等缺陷。本发明的提出为建立敏感山羊痘病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定基础；也为本发明研制出的山羊痘病毒抗体固相竞争Elisa试剂盒提供了关键标识物；另外，利用山羊痘弱毒苗经细胞扩大培养、浓缩、纯化后作为包被抗原，提高了灵敏度。

公开(公告)号：CN108676792B

公开(公告)日：2020-12-25

申请号：CN201810501728.0

申请日：2018-05-23

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 吴锦艳 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  曹小安 ,  惠小婷 ,  李玲霞 ,  关玉华 ,  刘湘涛 ,  刘永生

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/13 ,  C40B50/06 ,  C40B40/02

Abstract: 本发明公开了一种基于驼源抗PPRV cDNA文库及其制备方法和应用，属于生物技术领域。其利用PPRV弱毒苗及浓缩、纯化弱毒苗制备抗原免疫骆驼，获得高质量免疫血清及全血；利用两端分别带有SfiIA、SfiIB酶切位点引物逆转录外周血淋巴细胞提取的总mRNA，合成全长cDNA第一链，PCR扩增，SfiI单酶切后定向插入特定载体pGADT7‑SfiI，获得基于驼源抗小反刍兽疫病毒抗体cDNA文库。经鉴定：文库库容>约2.0×106cfu/mL，插入片段约400bp～2kbp，平均长度约1Kbp，多样性好，重组率约100%；功能性分析表明：所构建的cDNA文库中存在具有中和活性抗小反刍兽疫病毒VHH抗体。本发明的提出为筛选抗小反刍兽疫病毒VHH抗体提供了平台，为小反刍兽疫的早期治疗和诊断提供了新的技术手段。

公开(公告)号：CN108912226A

公开(公告)日：2018-11-30

申请号：CN201810844879.6

申请日：2018-07-27

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 吴锦艳 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  尹双辉 ,  曹小安 ,  王耀杰 ,  惠小婷 ,  关玉华 ,  刘湘涛 ,  刘永生

IPC: C07K16/08 ,  C07K1/34 ,  G01N33/535 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于双峰驼抗山羊痘病毒VHH-4-2及用途，属于生物技术领域。包含抗山羊痘病毒VHH-4-2，VHH-4-2的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明使用了功能化标记的VHH-4-2，避免了一抗、二抗以及抗抗体等步骤，提高了灵敏性、稳定性，缩短了时间，节约了资源。突破了传统Elisa方法费时、费力等缺陷。本发明的提出为建立敏感山羊痘病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定基础；也为本发明研制出具有完全自主知识产权的山羊痘病毒抗体固相竞争Elisa试剂盒提供了关键标识物；另外，利用山羊痘弱毒苗经细胞扩大培养、浓缩、纯化后作为包被抗原，提高了灵敏度。

公开(公告)号：CN108912226B

公开(公告)日：2020-06-09

申请号：CN201810844879.6

申请日：2018-07-27

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 吴锦艳 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  尹双辉 ,  曹小安 ,  王耀杰 ,  惠小婷 ,  关玉华 ,  刘湘涛 ,  刘永生

IPC: C07K16/08 ,  C07K1/34 ,  G01N33/535 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种基于双峰驼抗山羊痘病毒VHH‑4‑2及用途，属于生物技术领域。包含抗山羊痘病毒VHH‑4‑2，VHH‑4‑2的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明使用了功能化标记的VHH‑4‑2，避免了一抗、二抗以及抗抗体等步骤，提高了灵敏性、稳定性，缩短了时间，节约了资源。突破了传统Elisa方法费时、费力等缺陷。本发明的提出为建立敏感山羊痘病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定基础；也为本发明研制出具有完全自主知识产权的山羊痘病毒抗体固相竞争Elisa试剂盒提供了关键标识物；另外，利用山羊痘弱毒苗经细胞扩大培养、浓缩、纯化后作为包被抗原，提高了灵敏度。

公开(公告)号：CN108912225A

公开(公告)日：2018-11-30

申请号：CN201810843478.9

申请日：2018-07-27

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 吴锦艳 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  曹小安 ,  惠小婷 ,  关玉华 ,  王耀杰 ,  刘湘涛 ,  刘永生

IPC: C07K16/08 ,  C07K1/34 ,  G01N33/535 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供了一种基于双峰驼抗羊痘病毒VHH-4-1及用途，属于生物技术领域，包含抗山羊痘病毒VHH-4-1，VHH-4-1的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明提供的试剂盒由于使用了功能化标记的VHH-4-1，避免了一抗、二抗以及抗抗体等步骤，提高了灵敏性、稳定性，缩短了时间，节约了资源。突破了传统Elisa方法费时、费力等缺陷。本发明的提出为建立敏感山羊痘病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定基础；也为本发明研制出的山羊痘病毒抗体固相竞争Elisa试剂盒提供了关键标识物；另外，利用山羊痘弱毒苗经细胞扩大培养、浓缩、纯化后作为包被抗原，提高了灵敏度。