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公开(公告)号：CN106148568B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201610536974.0
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , G01N33/569 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种免疫磁珠试剂盒及其在检测小反刍兽疫病毒抗原中的用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV N蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105887208A
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201610281583.9
申请日：2016-05-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗羊痘病毒双峰驼VHH重链单域抗体cDNA文库及其制备方法，属于生物技术领域。单域抗体酵母cDNA文库包含羊痘弱毒苗免疫骆驼的抗原剂量、免疫程序和血清抗体效价；其制备方法包括：骆驼淋巴细胞分离、总RNA提取及mRNA分离、纯化；CDSⅢ和SMART引物逆转录合成全长cDNA；设计两套扩增引物，采用同源重组的方法将扩增产物与pGADT7共转染酵母细胞Y187；构建骆驼抗羊痘病毒的VHH基因cDNA文库；计算文库库容量；扩增cDNA文库进行质量评价等步骤。本发明提供了一种具备相对分子质量小、稳定性强、可溶性好、抗原结合性能好、易表达等优势的抗羊痘病毒的双峰驼VHH重链单域抗体酵母cDNA文库及其制备方法。
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公开(公告)号：CN104388594B
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201410745729.1
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种用于检测猪伪狂犬病毒的Taqman Real-time PCR试剂盒，包含扩增预混液、阴性对照、阳性对照以及序列SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:2的扩增引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物。本发明利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析，计算待检样品拷贝数，结果更为准确直观，省时省力，成本较低，时间由原来的3～4小时缩短到1～2小时；并且比普通PCR的灵敏度高，可用于检测低微含量的猪伪狂犬病毒样品；适用于科研单位定量分析；而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN105385785A
公开(公告)日：2016-03-09
申请号：CN201510719724.6
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2545/113 , C12Q2563/107 , C12Q2561/113
Abstract: 一种用于检测猪瘟病毒疫苗毒C株的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物，所述使用方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。本发明弥补了CSFV鉴别诊断上的薄弱环节，建立并组装了特异性检测猪瘟C株疫苗株的实时定量RT-PCR试剂盒。与普通RT-PCR方法相比，本发明省时、省力，成本较低。本发明能够用于快速、敏感、准确以及低成本地对猪瘟病毒疫苗毒C株进行检测及定量分析。
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公开(公告)号：CN105274256A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510719725.0
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2545/113 , C12Q2561/101 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107
Abstract: 一种用于检测猪圆环病毒PCV1的Taqman Real-timePCR试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包含扩增预混液、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物，所述检测方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。本发明设计了特异性针对PCV1的引物及探针，优化并组装成试剂盒。与普通RT-PCR方法相比，本发明省时、省力，成本较低，所述使用方法能快速、敏感、准确以及低成本地对猪圆环病毒PCV1进行检测及定量分析，该方法的建立对临床诊断PCV1和流行病学调查具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105274255A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510719384.7
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107
Abstract: 一种用于检测PRRSV欧洲株的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物，所述使用方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。本试剂盒省时、省力，成本较低，具有高度特异，敏感和简单等特点，能快速、敏感、准确以及低成本地对猪繁殖与呼吸综合征欧洲株病毒进行检测及定量分析。
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公开(公告)号：CN105238881A
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201510718218.5
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12Q2561/113 , C12Q2545/113
Abstract: 一种用于检测PRRSV经典疫苗株的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer 、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物，所述使用方法包括使用本试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。本发明弥补了PRRSV鉴别诊断上的薄弱环节，建立了特异检测疫苗株的实时定量PRRSV核酸检测。本发明能快速、敏感、准确以及低成本地对猪繁殖与呼吸综合征经典疫苗株病毒进行检测及定量分析。
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公开(公告)号：CN103667297B
公开(公告)日：2015-09-23
申请号：CN201310752351.3
申请日：2012-06-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , A61P31/14 , C12N15/867 , C12N15/10
Abstract: 一种用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的1010shRNA，所述包含siRNA序列、shRNA慢病毒表达载体构建、复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染Marc-145细胞（绿猴肾细胞）以及抑制PRRSV复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制PRRSV在敏感细胞上复制的作用。本发明对PRRSV体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向PRRSV基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒的siRNA的转基因动物。为RNAi应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因功能研究以及猪繁殖与呼吸综合征的防治积累了实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。
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公开(公告)号：CN103602636B
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201310499644.5
申请日：2013-10-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种抗羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）B2L蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明采用原核表达系统，用大肠杆菌表达的ORFV B2L蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合，筛选得到一株稳定分泌抗B2L蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其微生物保藏号是：CCTCC NO:C2013136。单克隆抗体的特异性试验结果表明，该杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体只与ORFV株发生反应，而与羊的其它相关病原，例如FMDV、POXV、JSRV、羊衣原体等不发生交叉反应。因此，本发明单克隆抗体可用于检测ORFV，并且本发明的提出为建立一种快速、简易、特异的ORFV诊断方法及其免疫机制研究、免疫功能检测等提供了物质基础。
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公开(公告)号：CN103255234B
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201310199211.8
申请日：2013-05-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的检测方法，通过设计一对引物和一条探针对样品的DNA模板进行实时荧光定量PCR检测，本发明还提供了利用上述检测方法检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒。本发明针对ORFV的保守区域H2L基因建立的实时定量方法特异性高，稳定性好；本发明用来检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒，操作简便，用户只需将待检样品的DNA加入反应管中，根据扩增曲线即可得出检测结果，省时省力，成本较低，时间由原来的3-4小时缩短到1-2小时；并且比普通PCR的灵敏度高，可用于检测低微含量的羊传染性脓包皮炎病毒，可适用于我国各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等，具有较好的应用前景。
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