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公开(公告)号：CN119979484A
公开(公告)日：2025-05-13
申请号：CN202510189224.X
申请日：2025-02-20
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明提供了一种高抗原产量的重组口蹄疫病毒株及其构建方法和应用，属于生物技术领域。一种重组口蹄疫病毒株，其中L蛋白是第108位氨基酸发生突变或缺失的突变L蛋白。本发明发现宿主蛋白RAB20过表达抑制FMDV的复制，且通过蛋白酶体通路降解L蛋白，进而抑制病毒复制；本发明通过在FMDV L蛋白中对关键氨基酸位点(108)进行突变，构建了不被宿主蛋白RAB20抑制复制的重组口蹄疫病毒株，所述重组病毒能够稳定传代，且在BHK‑21细胞上具有高病毒滴度的特性，提高了病毒滴度及抗原产量，能够用于FMDV疫苗制备，具备良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN114895027B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202210523485.7
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , C07K16/10 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑①免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑①通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑①免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑①蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN116672443B
公开(公告)日：2024-11-29
申请号：CN202310647769.1
申请日：2023-06-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 茹毅 , 刘华南 , 郭建宏 , 田宏 , 曹伟军 , 卢炳州 , 杨帆 , 申超超 , 张伟 , 李亚军 , 杨洋 , 郝荣增 , 朱紫祥 , 石正旺 , 张克山 , 何继军 , 靳野 , 李丹 , 毛箬青 , 张贵财 , 党文 , 马旭升 , 秦晓东 , 刘湘涛
IPC: A61K39/12 , A61K39/385 , A61K9/14 , A61K47/34 , A61K47/32 , A61K47/36 , A61K47/10 , A61K47/42 , A61K47/02 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种七组分抗原非洲猪瘟组合疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒抗原P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、X蛋白、C129R蛋白和Y蛋白组成的七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合，其中至少一种抗原与纳米颗粒载体形成含有所述抗原或其抗原表位的纳米颗粒；所述七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合能够刺激机体产生较强的免疫反应；其次本发明制备了包含上述七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合的疫苗，所述七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株的攻毒具有良好的免疫保护率，无生物安全风险，突破了国内外现有非洲猪瘟亚单位疫苗无法为猪体提供有效免疫保护的难题。
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公开(公告)号：CN116747296A
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN202310605961.4
申请日：2023-05-26
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 茹毅 , 刘华南 , 郭建宏 , 田宏 , 曹伟军 , 卢炳州 , 杨帆 , 申超超 , 张伟 , 李亚军 , 杨洋 , 石正旺 , 张克山 , 何继军 , 靳野 , 李丹 , 朱紫祥 , 毛箬青 , 郝荣增 , 张贵财 , 党文 , 马旭升 , 秦晓东 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种十一组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、E165R蛋白、C129R蛋白、P72蛋白、X蛋白、Y蛋白、A蛋白和B蛋白组成的非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合，所述非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合能够诱导机体产生较强的免疫反应；其次本发明制备了包含上述非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合的十一组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗，所述亚单位疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株的攻毒具有良好的免疫保护率，无生物安全风险，突破了国内外现有非洲猪瘟亚单位疫苗无法为猪体提供有效免疫保护的难题，证明了非洲猪瘟亚单位疫苗研究方案的可行性。
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公开(公告)号：CN116445486A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310322418.3
申请日：2023-03-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/12 , C12N7/00 , C12N5/10 , A61K39/135 , A61K38/17 , A61K48/00 , A61P31/14 , C12R1/91 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及KLHL34敲除细胞系的构建及作为小RNA病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中KLHL34基因表达能促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向KLHL34的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向KLHL34基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了KLHL34基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV疫苗的生产量和抗原产量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗尤其是FMDV疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114959113A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210524500.X
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C07K16/10
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑1免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑1通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑1免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑1蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN113355275A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110656125.X
申请日：2021-06-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种羔绵羊睾丸支持细胞、睾丸支持细胞亚克隆及其分离方法和应用，其中，所述支持细胞SCST的保藏编号为CCTCC No.C2019203，将其转染SV40大T抗原基因使其永生化，然后进行压力粗筛、压力分种以及持续传代，得到细胞亚克隆SCST‑T F13，其保藏编号为CCTCC No.C202130，可用于牛结节性皮肤病、羊痘及羊口疮等病毒的分离及规模化繁殖。所述细胞亚克隆可以用含国产血清的培养基培养，降低了生产成本，适合规模化生产应用。本发明的细胞亚克隆与常规原代细胞相比，而且能够明显提高牛结节性皮肤病毒的分离率，且牛结节性皮肤病毒的致病变时间明显缩短、分离病毒的拷贝数比传统细胞提高100倍以上，可以为牛结节性皮肤病毒的规模化繁殖及病毒感染致病机制研究提供工具。
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公开(公告)号：CN111996201B
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202010212907.X
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 曹伟军 , 蒋保余 , 朱紫祥 , 魏婷 , 郑敏 , 田宏 , 张克山 , 张伟 , 刘永杰 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组A型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供了塞内卡病毒重组核酸、包含所述重组核酸的塞内卡重组病毒、包含所述塞内卡重组病毒的塞内卡重组疫苗株及其制备方法和应用。本发明对SVV/FJ/001株基因缺失突变改造，在其cDNA中融合进A型FMDV的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的基因，且表达产物具有良好的反应原性；获得的疫苗株抗原产能高，致病性显著降低甚至对猪无致病性，灭活疫苗免疫动物后不仅能激发SVA的免疫应答，而且能产生针对融合基因的免疫活性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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公开(公告)号：CN112076314A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
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公开(公告)号：CN111996203A
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN202010212917.3
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 曹伟军 , 朱紫祥 , 宁建刚 , 马坤 , 郝荣增 , 张伟 , 郑敏 , 魏婷 , 蒋保余 , 田宏 , 张克山 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组O型口蹄疫病毒表位基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明获得SVV/FJ/001株全长cDNA，并对其5'UTR进行缺失及突变改造，同时在SVA cDNA中融合进串联的O型FMDV的重组表位基因，构建得到重组口蹄疫抗原表位的塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的口蹄疫B细胞表位和T细胞表位，且表达产物具有良好的反应原性，重组病毒的致病性显著降低甚至对猪无致病性，显著提高了毒株的生物安全性；制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性，在有效激发SVA中和抗体的同时还能产生针对FMDV的特异性抗体，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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