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公开(公告)号：CN113248574B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202110515657.1
申请日：2021-05-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/085 , C12N15/70 , C12N15/62 , C07K1/22 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种高效表达A型塞内卡病毒结构蛋白的方法。本发明首先对编码A型塞内卡病毒三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的基因进行原核表达密码子优化，并借助小泛素样融合蛋白，获得了在大肠杆菌中同时可溶性表达三种结构蛋白的单个质粒；其次，在大肠杆菌中转入分子伴侣质粒和上述A型塞内卡病毒结构蛋白质粒，进一步提高了A型塞内卡病毒结构蛋白的可溶性表达，并解决了目标蛋白表达量不均一的问题，获得的目标蛋白约占菌体总蛋白25％以上；由表达获得的三种结构蛋白配制获得的塞内卡病毒病亚单位疫苗，能够激发猪体产生较高水平的中和性抗体，对国内A型塞内卡流行毒具有良好的保护作用。
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公开(公告)号：CN112076314B
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
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公开(公告)号：CN111773383A
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN202010630218.0
申请日：2020-07-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 田宏 , 张克山 , 曹伟军 , 马旭升 , 党文 , 靳野
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种具有交叉保护作用的O型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明首先通过血清交叉中和试验，筛选中意外地发现对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用的毒株；以该毒株三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％-35％，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。由这三种口蹄疫病毒结构蛋白配制的口蹄疫疫苗，最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份，且对我国多株O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉保护作用。
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公开(公告)号：CN115340609B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202110516349.0
申请日：2021-05-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , A61K39/135 , A61K9/14 , A61P31/14 , B82Y5/00 , B82Y40/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法。本发明发现，在氨基酸序列改造后的Encapsulin蛋白片段的特定位置引入口蹄疫病毒抗原表位序列(包括B细胞表位和T细胞表位)能够实现目标蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达，并且能够成功自组装成蛋白笼纳米颗粒；组装的蛋白笼纳米颗粒，颗粒均一，并具有较高的耐热稳定性；所述组装的蛋白笼纳米颗粒经抗原乳化后免疫豚鼠和猪，均可刺激机体产生病毒中和性抗体，具有较好的免疫保护作用，可用于口蹄疫疫苗的制备。
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公开(公告)号：CN115340609A
公开(公告)日：2022-11-15
申请号：CN202110516349.0
申请日：2021-05-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , A61K39/135 , A61K9/14 , A61P31/14 , B82Y5/00 , B82Y40/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种口蹄疫病毒多抗原表位融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法。本发明发现，在氨基酸序列改造后的Encapsulin蛋白片段的特定位置引入口蹄疫病毒抗原表位序列(包括B细胞表位和T细胞表位)能够实现目标蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达，并且能够成功自组装成蛋白笼纳米颗粒；组装的蛋白笼纳米颗粒，颗粒均一，并具有较高的耐热稳定性；所述组装的蛋白笼纳米颗粒经抗原乳化后免疫豚鼠和猪，均可刺激机体产生病毒中和性抗体，具有较好的免疫保护作用，可用于口蹄疫疫苗的制备。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113248574A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110515657.1
申请日：2021-05-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/085 , C12N15/70 , C12N15/62 , C07K1/22 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种高效表达A型塞内卡病毒结构蛋白的方法。本发明首先对编码A型塞内卡病毒三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的基因进行原核表达密码子优化，并借助小泛素样融合蛋白，获得了在大肠杆菌中同时可溶性表达三种结构蛋白的单个质粒；其次，在大肠杆菌中转入分子伴侣质粒和上述A型塞内卡病毒结构蛋白质粒，进一步提高了A型塞内卡病毒结构蛋白的可溶性表达，并解决了目标蛋白表达量不均一的问题，获得的目标蛋白约占菌体总蛋白25％以上；由表达获得的三种结构蛋白配制获得的塞内卡病毒病亚单位疫苗，能够激发猪体产生较高水平的中和性抗体，对国内A型塞内卡流行毒具有良好的保护作用。
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公开(公告)号：CN112076314A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
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公开(公告)号：CN112076313B
公开(公告)日：2021-08-06
申请号：CN202011018201.6
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
IPC: A61K39/135 , A61K39/295 , A61K39/39 , A61P31/14 , C07K19/00 , C07K1/22 , C12P21/06 , C12N15/62 , C12N15/70
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明首先确定了两种作为口蹄疫疫苗抗原来源的我国口蹄疫O型和A型流行病毒；其次获得了分别或同时含有上述两种病毒结构蛋白VP0、VP3和VP1的口蹄疫亚单位疫苗；所述的口蹄疫亚单位疫苗全保护免疫剂量可低至单组份20μg/头份，且分别或同时对我国多株代表性O型口蹄疫流行毒或A型口蹄疫流行毒具有免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN111773383B
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN202010630218.0
申请日：2020-07-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 田宏 , 张克山 , 曹伟军 , 马旭升 , 党文 , 靳野
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种具有交叉保护作用的O型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明首先通过血清交叉中和试验，筛选中意外地发现对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用的毒株；以该毒株三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％‑35％，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。由这三种口蹄疫病毒结构蛋白配制的口蹄疫疫苗，最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份，且对我国多株O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉保护作用。
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公开(公告)号：CN112076313A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202011018201.6
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
IPC: A61K39/135 , A61K39/295 , A61K39/39 , A61P31/14 , C07K19/00 , C07K1/22 , C12P21/06 , C12N15/62 , C12N15/70
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明首先确定了两种作为口蹄疫疫苗抗原来源的我国口蹄疫O型和A型流行病毒；其次获得了分别或同时含有上述两种病毒结构蛋白VP0、VP3和VP1的口蹄疫亚单位疫苗；所述的口蹄疫亚单位疫苗全保护免疫剂量可低至单组份20μg/头份，且分别或同时对我国多株代表性O型口蹄疫流行毒或A型口蹄疫流行毒具有免疫保护作用。
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