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公开(公告)号：CN119574867A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411737999.8
申请日：2024-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/532 , G01N33/58
Abstract: 本发明涉及一种检测羊痘病毒抗体的胶体金试纸条、制备方法及应用。本发明首先制备了重组122蛋白，所述重组122蛋白具有显著的抗原性和免疫原性，可作为诊断羊痘病毒的良好靶标；其次，本发明制备了一种检测羊痘病毒抗体的胶体金试纸条，所述试纸条的PVC底板上依次排列有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫包被有金标记的重组122蛋白；本发明所述试纸条能够同时检测绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒、山羊痘病毒的抗体，灵敏度分别可达1:128、1:128和1:64，而与牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫O型病毒、口蹄疫A型病毒、羊口疮病毒、布鲁氏菌病、大肠杆菌病均无交叉反应，特异性良好，诊断符合率达93％。
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公开(公告)号：CN116672443B
公开(公告)日：2024-11-29
申请号：CN202310647769.1
申请日：2023-06-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 茹毅 , 刘华南 , 郭建宏 , 田宏 , 曹伟军 , 卢炳州 , 杨帆 , 申超超 , 张伟 , 李亚军 , 杨洋 , 郝荣增 , 朱紫祥 , 石正旺 , 张克山 , 何继军 , 靳野 , 李丹 , 毛箬青 , 张贵财 , 党文 , 马旭升 , 秦晓东 , 刘湘涛
IPC: A61K39/12 , A61K39/385 , A61K9/14 , A61K47/34 , A61K47/32 , A61K47/36 , A61K47/10 , A61K47/42 , A61K47/02 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种七组分抗原非洲猪瘟组合疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒抗原P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、X蛋白、C129R蛋白和Y蛋白组成的七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合，其中至少一种抗原与纳米颗粒载体形成含有所述抗原或其抗原表位的纳米颗粒；所述七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合能够刺激机体产生较强的免疫反应；其次本发明制备了包含上述七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合的疫苗，所述七组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株的攻毒具有良好的免疫保护率，无生物安全风险，突破了国内外现有非洲猪瘟亚单位疫苗无法为猪体提供有效免疫保护的难题。
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公开(公告)号：CN118421572A
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202410578697.4
申请日：2024-05-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明具体涉及一种缺失二十四个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV‑CN/GS‑2018病毒中联合缺失KP177R、L83L、L60L、ASFV‑G‑ACD‑00090、ASFV‑G‑ACD‑00120、285L、ASFV‑G‑ACD‑00160，以及MGF‑360、MGF‑110、MGF‑300、MGF‑100等24个基因，获得了一株减毒非洲猪瘟疫苗株；所述减毒非洲猪瘟疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康、免疫后在猪血液内检测到高水平保护性抗体的存在，且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全有效的非洲猪瘟候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN116747296A
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN202310605961.4
申请日：2023-05-26
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 茹毅 , 刘华南 , 郭建宏 , 田宏 , 曹伟军 , 卢炳州 , 杨帆 , 申超超 , 张伟 , 李亚军 , 杨洋 , 石正旺 , 张克山 , 何继军 , 靳野 , 李丹 , 朱紫祥 , 毛箬青 , 郝荣增 , 张贵财 , 党文 , 马旭升 , 秦晓东 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种十一组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、E165R蛋白、C129R蛋白、P72蛋白、X蛋白、Y蛋白、A蛋白和B蛋白组成的非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合，所述非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合能够诱导机体产生较强的免疫反应；其次本发明制备了包含上述非洲猪瘟病毒抗原蛋白组合的十一组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗，所述亚单位疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株的攻毒具有良好的免疫保护率，无生物安全风险，突破了国内外现有非洲猪瘟亚单位疫苗无法为猪体提供有效免疫保护的难题，证明了非洲猪瘟亚单位疫苗研究方案的可行性。
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公开(公告)号：CN115851623A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211706841.5
申请日：2022-12-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及MGF 505‑2R基因缺失减毒株及疫苗。本发明首先发现在非洲猪瘟病毒上敲除上述基因能够减弱非洲猪瘟病毒的毒力，是制备减毒猪瘟疫苗的新靶标基因；采用基因工程手段在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018中缺失非洲猪瘟病毒MGF 505‑2R基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康，且能够对II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018强毒株攻毒(102HAD50剂量)提供良好的免疫保护作用，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN114107228A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111335696.X
申请日：2021-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 冯涛 , 李攀 , 刘华南 , 石正旺 , 马昭 , 申超超 , 齐晓兰 , 吴盼雪 , 张克山 , 李丹 , 党文 , 杨波 , 王琦 , 曹丽艳 , 朱紫祥 , 田宏 , 郭建宏 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种缺失十二个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV CN/GS 2018病毒中联合缺失G‑ACD‑00190、MGF 110‑9L、G‑ACD‑00210、MGF 360(9L、10L、11L、12L、13L、14L)、MGF 505(1R、2R、3R)基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株减毒非洲猪瘟疫苗株；所述减毒非洲猪瘟疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康、免疫后在猪血液内检测不到病毒的存在，且能够对ASFVCN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN113151310A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110176679.X
申请日：2021-02-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种可用作疫苗的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株及其构建方法，该病毒株是亲本非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株的基因缺失弱毒株。本发明发现了DP71L基因是对猪致病性致弱的新靶标基因，并发现联合丧失MGF360‑18R基因、DP71L基因和DP96R基因编码蛋白的功能，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株高剂量(104HAD50)免疫猪后，对猪完全致弱，免疫猪健康，不发病，与免疫猪同居猪核酸也呈阴性，不水平传播，具有较好安全性；且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株的攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN112592401B
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN202011452599.4
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN112522444A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011529612.1
申请日：2020-12-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒LAMP‑CRISPR检测用组合物、检测试剂盒和检测方法，该组合物包括LAMP扩增引物、crRNA和ssDNA荧光报告探针。该试剂盒包括上述组合物，还包括用于LAMP扩增的LAMP反应缓冲液、Bst DNA聚合酶和p72质粒模板，以及用于CRISPR Cas12a检测体系的LbCas12a、RNase抑制剂、CRISPR反应缓冲液。本发明采用LAMP方法与CRISPR相结合的技术，可高效、精准并且不需借助大型仪器达到检测结果可视化的目的，为ASFV的快速诊断提供了新的技术支持。本发明建立的LAMP‑CRISPR对ASFV抗原分子的检测具有较高的灵敏度，能够检测到单拷贝即7×100copies/μL的质粒浓度。
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公开(公告)号：CN108384893A
公开(公告)日：2018-08-10
申请号：CN201810415406.4
申请日：2018-05-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的实时荧光定量RT-PCR试剂盒及其应用。所述试剂盒包含分别用于检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的引物以及探针，优选的，所述试剂盒中还包含核酸提取液、2×Direct qRT-PCR Mix、酶混合液、阴性对照、阳性对照。使用本发明的试剂盒检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒，具有特异性高，灵敏度高，稳定性好，操作简便等优点，用户无需额外提取病毒RNA，无需反转录，只需将待检样品加入反应管中，利用荧光信号的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析，即可计算待检样品拷贝数。不仅适用于科研单位定量分析，而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有良好的应用前景。
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