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公开(公告)号：CN112592401A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011452599.4
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN111040031B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201911283478.9
申请日：2019-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒ScFv抗体及其制备方法，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列连接至PET‑30a载体，然后转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN111040031A
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201911283478.9
申请日：2019-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒ScFv抗体及其制备方法，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT-PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE-PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列连接至PET-30a载体，然后转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN116444652B
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202310039309.0
申请日：2023-01-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒特异性单链抗体的制备方法。包括以下步骤：S1：提取猪淋巴细胞总RNA并合成cDNA，并以所述cDNA为模板，扩增组装ScFv的基因Vκ/Vλ‑linker‑VH；S2：通过同源重组反应将ScFv的基因插入到噬菌粒中，转化感受态细胞，培养、分离纯化噬菌体，获得VH‑Vκ与VH‑Vλ免疫库；S3：筛选免疫库中的特异性抗体，获得目标ScFv；S4：对S3筛选到的目标ScFv进行ELISA鉴定，获得噬菌体阳性单克隆；S5：对S4的噬菌体阳性单克隆进行表达、验证。本发明通过构建噬菌体抗体库，筛选出了具有生物活性强、结合抗原能力强的抗ASFV单链抗体。
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公开(公告)号：CN112500478A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011452597.5
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6及其制备方法。ScFv抗体VH‑VLλ6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ6进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111560069A
公开(公告)日：2020-08-21
申请号：CN202010412676.7
申请日：2020-05-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒的单链抗体及其制备方法和用途，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT-PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE-PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至pET-30a载体，转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体(VH-VLκ6)，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体(VH-VLκ6)进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供了新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN116444652A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310039309.0
申请日：2023-01-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒特异性单链抗体的制备方法。包括以下步骤：S1：提取猪淋巴细胞总RNA并合成cDNA，并以所述cDNA为模板，扩增组装ScFv的基因Vκ/Vλ‑linker‑VH；S2：通过同源重组反应将ScFv的基因插入到噬菌粒中，转化感受态细胞，培养、分离纯化噬菌体，获得VH‑Vκ与VH‑Vλ免疫库；S3：筛选免疫库中的特异性抗体，获得目标ScFv；S4：对S3筛选到的目标ScFv进行ELISA鉴定，获得噬菌体阳性单克隆；S5：对S4的噬菌体阳性单克隆进行表达、验证。本发明通过构建噬菌体抗体库，筛选出了具有生物活性强、结合抗原能力强的抗ASFV单链抗体。
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公开(公告)号：CN112500478B
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202011452597.5
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6及其制备方法。ScFv抗体VH‑VLλ6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ6进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN113092753A
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN202110364113.X
申请日：2021-04-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种用于全程监测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金双联检测试纸条及其制备方法，所述试纸条包括PVC底板，所述的PVC底板上从左到右依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述结合垫包被胶体金标记的ASFV p30蛋白和ASFV p72蛋白，所述检测线包被ASFV p72和ASFV p30蛋白，所述质控线C包被抗ASFV p30蛋白单克隆抗体和/或抗ASFV p72蛋白单克隆抗体；本发明通过优化结合垫的制备，实现了非洲猪瘟病毒抗体的全程监控，相比于单个的p30或p72试纸条可以更加准确的获悉机体的感染时期，同时结合其特异性好、灵敏性较高，有望成为非洲猪瘟抗体的现场或者实验室检测的技术手段，为非洲猪瘟的精确、快速诊断提供一种新思路。
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公开(公告)号：CN111560069B
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202010412676.7
申请日：2020-05-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒的单链抗体及其制备方法和用途，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至pET‑30a载体，转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体(VH‑VLκ6)，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体(VH‑VLκ6)进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供了新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术手段。
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