公开(公告)号：CN114316034B

公开(公告)日：2022-08-26

申请号：CN202111550215.7

申请日：2021-12-17

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  曹丽艳 ,  田宏 ,  王琦 ,  孔祥雨 ,  石正旺 ,  周改静

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/13 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  A61K39/42 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体、该单克隆抗体的表位及其应用。所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。该抗体能够特异性的识别并结合P30蛋白的区域为61～100 aa。该抗体保留了轻链、重链可变区的天然配对，具有基因多样性好、全猪源、抗体亲和力好、特异性强等优势，也为探究P30蛋白的功能提供了可靠的研究工具。本发明为开发非洲猪瘟病毒诊断试剂盒提供了新型原材料，也为研制全猪源单克隆抗体的预防与治疗性药物提供了新的技术支持。

公开(公告)号：CN114316034A

公开(公告)日：2022-04-12

申请号：CN202111550215.7

申请日：2021-12-17

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  曹丽艳 ,  田宏 ,  王琦 ,  孔祥雨 ,  石正旺 ,  周改静

IPC: C07K16/10 ,  C12N15/13 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  A61K39/42 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体、该单克隆抗体的表位及其应用。所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。该抗体能够特异性的识别并结合P30蛋白的区域为61～100 aa。该抗体保留了轻链、重链可变区的天然配对，具有基因多样性好、全猪源、抗体亲和力好、特异性强等优势，也为探究P30蛋白的功能提供了可靠的研究工具。本发明为开发非洲猪瘟病毒诊断试剂盒提供了新型原材料，也为研制全猪源单克隆抗体的预防与治疗性药物提供了新的技术支持。

公开(公告)号：CN116143887A

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202211096917.7

申请日：2022-09-08

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  石正旺 ,  田宏 ,  周改静 ,  罗俊聪 ,  张晓阳 ,  万颖 ,  茹毅 ,  杨帆

IPC: C07K14/01 ,  C07K16/08 ,  C12N15/34 ,  C12N15/70 ,  C12N5/20 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及非洲猪瘟p72蛋白的抗原表位肽、针对该抗原表位肽的单抗克隆抗体及其应用。本发明通过将非洲猪瘟病毒p72基因克隆至原核表达载体pET‑30a中，构建出原核表达载体pET‑30a‑p72，表达并纯化得到p72重组蛋白。将p72重组蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合获得杂交瘤细胞，应用间接ELISA方法筛选获得抗p72重组蛋白的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的p72蛋白的抗原表位肽为非洲猪瘟病毒p72蛋白20～39肽段，其氨基酸序列为20ILAQDLLNSRISNIKNVNKS39。

公开(公告)号：CN116042908A

公开(公告)日：2023-05-02

申请号：CN202211003354.2

申请日：2022-08-19

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  田宏 ,  石正旺 ,  罗俊聪 ,  万颖 ,  周改静 ,  廖焕陈 ,  周静 ,  张成琪 ,  张晓阳

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种用于快速检测非洲猪瘟病毒的RPA扩增与测流层析免疫试纸条相结合的试剂盒。该试剂盒包含用于检测非洲猪瘟病毒的引物以及探针，其中所述的引物由上游引物和下游引物组成，该试剂盒中还包含用于检测非洲猪瘟病毒的扩增混合酶，该混合酶中含有UNG酶。与现有技术相比，本发明为ASFV的分子诊断提供了一个快速、简便、准确的检测试剂，特别是具有对仪器设备要求低，只需要一个恒温水浴锅或者恒温装置，检测速度快，约30min即可，不仅适用于科研单位定量分析，而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN113092753A

公开(公告)日：2021-07-09

申请号：CN202110364113.X

申请日：2021-04-03

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  田宏 ,  万颖 ,  石正旺 ,  罗俊聪 ,  彭高闯 ,  王丽娟 ,  茹毅 ,  麻园 ,  周改静 ,  宋锐

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种用于全程监测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金双联检测试纸条及其制备方法，所述试纸条包括PVC底板，所述的PVC底板上从左到右依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述结合垫包被胶体金标记的ASFV p30蛋白和ASFV p72蛋白，所述检测线包被ASFV p72和ASFV p30蛋白，所述质控线C包被抗ASFV p30蛋白单克隆抗体和/或抗ASFV p72蛋白单克隆抗体；本发明通过优化结合垫的制备，实现了非洲猪瘟病毒抗体的全程监控，相比于单个的p30或p72试纸条可以更加准确的获悉机体的感染时期，同时结合其特异性好、灵敏性较高，有望成为非洲猪瘟抗体的现场或者实验室检测的技术手段，为非洲猪瘟的精确、快速诊断提供一种新思路。