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公开(公告)号：CN119269792A
公开(公告)日：2025-01-07
申请号：CN202411399260.0
申请日：2024-10-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: G01N33/569 , G01N21/78 , G01N33/543 , G01N33/535
Abstract: 本发明属于检测技术领域，具体涉及一种牛结节性皮肤病毒、绵羊痘病毒和山羊痘病毒的通用型试剂盒。本发明以表达的特定重组p122蛋白为基础，以待检血清为检测样本，建立了一种牛结节性皮肤病毒、绵羊痘病毒和山羊痘病毒的双抗原夹心ELISA方法，所述方法包括包被抗原、封闭、加入待检样品和酶标抗原、显色和结果判定等步骤；具有特异性好、敏感性高、重复性好、成本低及可批量检测的优点，可为预防和控制牛结节性皮肤病毒、绵羊痘病毒和山羊痘病毒奠定一定的检测技术基础。
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公开(公告)号：CN111040031A
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201911283478.9
申请日：2019-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒ScFv抗体及其制备方法，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT-PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE-PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列连接至PET-30a载体，然后转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN118852447A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410996016.6
申请日：2024-07-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鼠源抗猪IgA的单链抗体及应用，所述的单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，将鼠源抗体可变区的基因序列与所制备的单链抗体的基因序列进行了比对分析，结果表明所述的单链抗体的基因序列与鼠源抗体可变区的基因序列基本一致，证明所构建的抗体基因序列是正确的，所述的单链抗体填补了目前市场上抗猪源IgA单链抗体的空白，为猪源IgA抗体的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制猪腹泻疾病的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN116444652B
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202310039309.0
申请日：2023-01-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒特异性单链抗体的制备方法。包括以下步骤：S1：提取猪淋巴细胞总RNA并合成cDNA，并以所述cDNA为模板，扩增组装ScFv的基因Vκ/Vλ‑linker‑VH；S2：通过同源重组反应将ScFv的基因插入到噬菌粒中，转化感受态细胞，培养、分离纯化噬菌体，获得VH‑Vκ与VH‑Vλ免疫库；S3：筛选免疫库中的特异性抗体，获得目标ScFv；S4：对S3筛选到的目标ScFv进行ELISA鉴定，获得噬菌体阳性单克隆；S5：对S4的噬菌体阳性单克隆进行表达、验证。本发明通过构建噬菌体抗体库，筛选出了具有生物活性强、结合抗原能力强的抗ASFV单链抗体。
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公开(公告)号：CN116143887A
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202211096917.7
申请日：2022-09-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/01 , C07K16/08 , C12N15/34 , C12N15/70 , C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及非洲猪瘟p72蛋白的抗原表位肽、针对该抗原表位肽的单抗克隆抗体及其应用。本发明通过将非洲猪瘟病毒p72基因克隆至原核表达载体pET‑30a中，构建出原核表达载体pET‑30a‑p72，表达并纯化得到p72重组蛋白。将p72重组蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合获得杂交瘤细胞，应用间接ELISA方法筛选获得抗p72重组蛋白的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的p72蛋白的抗原表位肽为非洲猪瘟病毒p72蛋白20～39肽段，其氨基酸序列为20ILAQDLLNSRISNIKNVNKS39。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112500478A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011452597.5
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6及其制备方法。ScFv抗体VH‑VLλ6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ6进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN111560069A
公开(公告)日：2020-08-21
申请号：CN202010412676.7
申请日：2020-05-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒的单链抗体及其制备方法和用途，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT-PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE-PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至pET-30a载体，转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体(VH-VLκ6)，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体(VH-VLκ6)进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供了新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN119574867A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411737999.8
申请日：2024-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/532 , G01N33/58
Abstract: 本发明涉及一种检测羊痘病毒抗体的胶体金试纸条、制备方法及应用。本发明首先制备了重组122蛋白，所述重组122蛋白具有显著的抗原性和免疫原性，可作为诊断羊痘病毒的良好靶标；其次，本发明制备了一种检测羊痘病毒抗体的胶体金试纸条，所述试纸条的PVC底板上依次排列有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫包被有金标记的重组122蛋白；本发明所述试纸条能够同时检测绵羊痘病毒、牛结节性皮肤病病毒、山羊痘病毒的抗体，灵敏度分别可达1:128、1:128和1:64，而与牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫O型病毒、口蹄疫A型病毒、羊口疮病毒、布鲁氏菌病、大肠杆菌病均无交叉反应，特异性良好，诊断符合率达93％。
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公开(公告)号：CN112592401B
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN202011452599.4
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN112522444A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011529612.1
申请日：2020-12-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒LAMP‑CRISPR检测用组合物、检测试剂盒和检测方法，该组合物包括LAMP扩增引物、crRNA和ssDNA荧光报告探针。该试剂盒包括上述组合物，还包括用于LAMP扩增的LAMP反应缓冲液、Bst DNA聚合酶和p72质粒模板，以及用于CRISPR Cas12a检测体系的LbCas12a、RNase抑制剂、CRISPR反应缓冲液。本发明采用LAMP方法与CRISPR相结合的技术，可高效、精准并且不需借助大型仪器达到检测结果可视化的目的，为ASFV的快速诊断提供了新的技术支持。本发明建立的LAMP‑CRISPR对ASFV抗原分子的检测具有较高的灵敏度，能够检测到单拷贝即7×100copies/μL的质粒浓度。
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