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公开(公告)号：CN113151310B
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202110176679.X
申请日：2021-02-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种可用作疫苗的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株及其构建方法，该病毒株是亲本非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株的基因缺失弱毒株。本发明发现了DP71L基因是对猪致病性致弱的新靶标基因，并发现联合丧失MGF360‑18R基因、DP71L基因和DP96R基因编码蛋白的功能，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株高剂量(104HAD50)免疫猪后，对猪完全致弱，免疫猪健康，不发病，与免疫猪同居猪核酸也呈阴性，不水平传播，具有较好安全性；且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株的攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN114015660A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111334156.X
申请日：2021-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 冯涛 , 马昭 , 刘华南 , 李攀 , 石正旺 , 申超超 , 吴盼雪 , 齐晓兰 , 张克山 , 李丹 , 党文 , 杨波 , 王琦 , 曹丽艳 , 朱紫祥 , 田宏 , 郭建宏 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及缺失十个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV CN/GS 2018病毒中联合缺失了I177L、MGF 360(9L、10L、11L、12L、13L、14L)、MGF 505(1R、2R、3R)基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康，且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN111040031A
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201911283478.9
申请日：2019-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒ScFv抗体及其制备方法，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT-PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE-PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列连接至PET-30a载体，然后转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN114107228B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202111335696.X
申请日：2021-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 冯涛 , 李攀 , 刘华南 , 石正旺 , 马昭 , 申超超 , 齐晓兰 , 吴盼雪 , 张克山 , 李丹 , 党文 , 杨波 , 王琦 , 曹丽艳 , 朱紫祥 , 田宏 , 郭建宏 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种缺失十二个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV CN/GS 2018病毒中联合缺失G‑ACD‑00190、MGF 110‑9L、G‑ACD‑00210、MGF 360(9L、10L、11L、12L、13L、14L)、MGF 505(1R、2R、3R)基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株减毒非洲猪瘟疫苗株；所述减毒非洲猪瘟疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康、免疫后在猪血液内检测不到病毒的存在，且能够对ASFVCN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN114015660B
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202111334156.X
申请日：2021-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 冯涛 , 马昭 , 刘华南 , 李攀 , 石正旺 , 申超超 , 吴盼雪 , 齐晓兰 , 张克山 , 李丹 , 党文 , 杨波 , 王琦 , 曹丽艳 , 朱紫祥 , 田宏 , 郭建宏 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及缺失十个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV CN/GS 2018病毒中联合缺失了I177L、MGF 360(9L、10L、11L、12L、13L、14L)、MGF 505(1R、2R、3R)基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康，且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114807062A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210240926.2
申请日：2022-03-10
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒I73R基因条件性缺失毒株的构建及其作为疫苗的应用。本发明在基因Ⅱ型非洲猪瘟(African swine fever，ASF)亲本毒株ASFV CN/GS/2018中条件性敲除I73R基因构建了ASFV I73R基因条件性缺失毒株(vI73Ri)；所述vI73Ri是一株安全性高的减毒ASF候选疫苗株，对猪完全致弱、免疫猪无典型ASF临床症状、免疫后在猪血液内检测到非常低的病毒，且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控ASF疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN112592401A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011452599.4
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN111040031B
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN201911283478.9
申请日：2019-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒ScFv抗体及其制备方法，本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列连接至PET‑30a载体，然后转化BL21感受态细胞，从转化后的单个菌落中筛选得到针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体，采用ELISA试验对筛选得到的ScFv抗体进行初步活性鉴定，表明此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN114807062B
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202210240926.2
申请日：2022-03-10
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒I73R基因条件性缺失毒株的构建及其作为疫苗的应用。本发明在基因Ⅱ型非洲猪瘟(African swine fever，ASF)亲本毒株ASFV CN/GS/2018中条件性敲除I73R基因构建了ASFV I73R基因条件性缺失毒株(vI73Ri)；所述vI73Ri是一株安全性高的减毒ASF候选疫苗株，对猪完全致弱、免疫猪无典型ASF临床症状、免疫后在猪血液内检测到非常低的病毒，且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控ASF疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN116444652B
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202310039309.0
申请日：2023-01-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒特异性单链抗体的制备方法。包括以下步骤：S1：提取猪淋巴细胞总RNA并合成cDNA，并以所述cDNA为模板，扩增组装ScFv的基因Vκ/Vλ‑linker‑VH；S2：通过同源重组反应将ScFv的基因插入到噬菌粒中，转化感受态细胞，培养、分离纯化噬菌体，获得VH‑Vκ与VH‑Vλ免疫库；S3：筛选免疫库中的特异性抗体，获得目标ScFv；S4：对S3筛选到的目标ScFv进行ELISA鉴定，获得噬菌体阳性单克隆；S5：对S4的噬菌体阳性单克隆进行表达、验证。本发明通过构建噬菌体抗体库，筛选出了具有生物活性强、结合抗原能力强的抗ASFV单链抗体。
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