快速检测猪细小病毒的实时荧光RPA试剂盒、试纸条RPA试剂盒及其用途

    公开(公告)号:CN105603123B

    公开(公告)日:2020-01-31

    申请号:CN201610049300.8

    申请日:2016-01-25

    Abstract: 本发明公开了一种快速检测猪细小病毒(PPV)的实时荧光RPA(PPV real‑time RPA)试剂盒及其用途,还公开了一种快速检测PPV的试纸条RPA(LFS RPA)试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及2所示的引物及各自的探针,虽然针对同一靶标序列,但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应,并均只能特异性检测PPV。分别用本发明的两个试剂盒检测PPV疑似样品,结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR均具有很高的符合度。因此,本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测PPV,为PPV的鉴别诊断提供了有效技术手段。

    一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法

    公开(公告)号:CN110724690A

    公开(公告)日:2020-01-24

    申请号:CN201910825712.X

    申请日:2019-09-03

    Abstract: 本发明公开了一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法,具体涉及小反刍兽疫病毒(PPRV)检测技术领域,具体方法如下:S1、获得山羊SLAM基因和氨基酸序列,设计特异性引物,通过RT-PCR方法获得SLAM基因片段;S2、将扩增的SLAM基因片段克隆到PET SUMO载体中,构建阳性重组质粒PET SUMO-SLAM;S3、将阳性重组质粒PET SUMO-SLAM转化到感受态Rosetta细胞中;S4、将转化的细胞在LB培养基平板中培养;S5、将含有构建的质粒的新转化的大肠杆菌的单菌落在LB液体培养基中培养;S6、IPTG诱导融合蛋白的表达,然后通过SDS PAGE分析。本发明为PPRV抗原检测提供一种捕获蛋白,用于开发PPRV抗原检测试剂盒,从而用于检测PPRV病毒,使得检测方法具有更好的特异性和灵敏性。

    外源性人端粒酶反转录酶基因重组慢病毒颗粒的获得方法

    公开(公告)号:CN110499331A

    公开(公告)日:2019-11-26

    申请号:CN201910735113.9

    申请日:2019-08-09

    Abstract: 本发明公开了外源性人端粒酶反转录酶基因重组慢病毒颗粒的获得方法,具体涉及生物技术领域,包括以下步骤:S1、准备材料和试剂;S2、构建pLVX-puro-hTERT重组慢病毒载体;S3、表达hTERT基因重组慢病毒颗粒的获得。本发明通过携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒,慢病毒载体能够将目的基因高效整合于宿主基因组,从而实现外源基因长期、稳定的表达,整个慢病毒颗粒获取操作方便,获取的慢病毒颗粒对于后期的感染细胞,使正常体细胞永生化得到保证,可获得稳定增殖的永生化细胞系,并且侵染效率高,稳定性较好。

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