-
公开(公告)号：CN111751553B
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202010563205.6
申请日：2020-06-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明以筛选的小反刍兽疫病毒(Peste Des Petits Ruminants Virus,PPRV)H蛋白B细胞表位为基础，选择其中反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原，建立针对PPRV H蛋白抗体的iELISA方法，多表位抗原肽的最佳包被量为1.5×10‑6ug/孔，待检血清阴阳性临界稀释浓度为1:100，酶标二抗最佳稀释浓度为1:80000；包被液为碳酸盐缓冲液，血清和二抗稀释液均为PBST溶液，封闭液为2％BSA溶液；阴阳性临界值为0.25。通过对临床血清检测表明，批内及批间检测结果变异系数均小于10％；该方法具有良好的特异性；与ID‑Vet公司生产的cELISA试剂盒对306份血清比较检测，两者符合率为92.75％。PPRV H蛋白抗体iELISA检测方法可用于临床小反刍兽疫抗体检测，其操作比cELISA更为省时省力，简便快捷。
-
公开(公告)号：CN112255401A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202011130996.X
申请日：2020-10-21
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/58 , G01N21/76
Abstract: 本发明建立针对PPRV H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法，设计合成PPRV H蛋白B细胞表位作为抗原，通过优化各步反应条件，确定临界值且进行特异性、敏感性及重复性试验。研究证实建立的检测方法临界值为S/P>9.77％，敏感性为95.43％，特异性为92.23％，批内及批间变异系数均小于10％，具有良好的敏感性、特异性和可重复性。通过对247份田间血清的平行检测，建立的方法与国外商品化PPRV cELISA试剂盒相对符合率为94.33％，且该方法敏感性高于国外商品化PPRV cELISA试剂盒。表明建立的H蛋白抗体化学发光免疫分析方法可用于相关检测试剂盒的开发。
-
公开(公告)号：CN109837250A
公开(公告)日：2019-06-04
申请号：CN201910087613.6
申请日：2019-01-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为羔羊睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT-LSC，其保藏编号为CCTCC NO：C2018202。试验发现，hTERT–LSC细胞系可以连续传代60代以上，且生长增殖特性保持不变，该细胞系对接种羊痘病毒较为敏感，可以高效增殖羊痘病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的羊痘病毒滴度与羔羊睾丸支持细胞LSC相当，且细胞分种率高于LSC，分种率可达1:3。同时利用该永生化细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊痘病毒疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊痘病毒疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。
-
公开(公告)号：CN109735499B
公开(公告)日：2021-10-15
申请号：CN201910037462.3
申请日：2019-01-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑NBSC，其保藏编号CCTCC NO：C2018201。试验发现，hTERT‑NBSC可以连续传代65代以上，且生长增殖特性保持不变。该细胞系对接种ORFV较为敏感，可以高效增殖ORFV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的ORFV病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞相当，且细胞分种率高于NBSC，分种率可达1:3。同时利用该传代细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊传染性脓疱病疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊传染性脓疱病疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。
-
公开(公告)号：CN111500542B
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN202010300902.2
申请日：2020-04-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种牛睾丸支持细胞癌细胞及其在痘病毒分离、培养中的应用。所述的牛睾丸支持细胞癌细胞，命名为牛睾丸支持细胞癌细胞BTSCC，其保藏编号为CCTCC NO：C201931。进一步的，本发明还提出了所述的牛睾丸支持细胞癌细胞在分离、培养ORFV和GTPV等痘病毒中的应用。该细胞对ORFV和GTPV细胞毒较为敏感，可以高效增殖ORFV和GTPV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞所增殖的病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞(NBSC)相当，且生长速度很快，分种率很高，可以用低血清培养条件下生长。利用该细胞分离、培养ORFV和GTPV病毒可提高试验效率，降低试验成本，同时保证了用其制备的疫苗质量的稳定。本发明的提出对痘病毒的培养及其疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111751553A
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN202010563205.6
申请日：2020-06-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明以筛选的小反刍兽疫病毒(Peste Des Petits Ruminants Virus,PPRV)H蛋白B细胞表位为基础，选择其中反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原，建立针对PPRV H蛋白抗体的iELISA方法，多表位抗原肽的最佳包被量为1.5×10-6ug/孔，待检血清阴阳性临界稀释浓度为1:100，酶标二抗最佳稀释浓度为1:80000；包被液为碳酸盐缓冲液，血清和二抗稀释液均为PBST溶液，封闭液为2％BSA溶液；阴阳性临界值为0.25。通过对临床血清检测表明，批内及批间检测结果变异系数均小于10％；该方法具有良好的特异性；与ID-Vet公司生产的cELISA试剂盒对306份血清比较检测，两者符合率为92.75％。PPRV H蛋白抗体iELISA检测方法可用于临床小反刍兽疫抗体检测，其操作比cELISA更为省时省力，简便快捷。
-
公开(公告)号：CN111187751A
公开(公告)日：2020-05-22
申请号：CN202010061679.0
申请日：2020-01-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于幼畜心肌炎细胞模型的细胞系，属于生物医学技术领域。所述细胞系为豚鼠心肌细胞，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201932。同时提供了一种利用该细胞系建立口蹄疫病毒致幼畜心肌炎细胞模型的方法。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：本发明的细胞模型建立方法具有很好的重复性，在口蹄疫病毒易感试验动物——豚鼠心肌原代细胞获得后，可以直接使用口蹄疫病毒感染心肌原代细胞模型，进而在细胞水平和分子水平上对口蹄疫病毒对幼畜心肌炎致病机制进行深入研究。具有经济、省时、表现均一，且重复性好的优点。
-
公开(公告)号：CN110724690A
公开(公告)日：2020-01-24
申请号：CN201910825712.X
申请日：2019-09-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/12 , C12N15/70 , C07K14/705 , C07K1/22
Abstract: 本发明公开了一种山羊SLAM基因的克隆与原核表达方法，具体涉及小反刍兽疫病毒(PPRV)检测技术领域，具体方法如下：S1、获得山羊SLAM基因和氨基酸序列，设计特异性引物，通过RT-PCR方法获得SLAM基因片段；S2、将扩增的SLAM基因片段克隆到PET SUMO载体中，构建阳性重组质粒PET SUMO-SLAM；S3、将阳性重组质粒PET SUMO-SLAM转化到感受态Rosetta细胞中；S4、将转化的细胞在LB培养基平板中培养；S5、将含有构建的质粒的新转化的大肠杆菌的单菌落在LB液体培养基中培养；S6、IPTG诱导融合蛋白的表达，然后通过SDS PAGE分析。本发明为PPRV抗原检测提供一种捕获蛋白，用于开发PPRV抗原检测试剂盒，从而用于检测PPRV病毒，使得检测方法具有更好的特异性和灵敏性。
-
公开(公告)号：CN111500542A
公开(公告)日：2020-08-07
申请号：CN202010300902.2
申请日：2020-04-16
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种牛睾丸支持细胞癌细胞及其在痘病毒分离、培养中的应用。所述的牛睾丸支持细胞癌细胞，命名为牛睾丸支持细胞癌细胞BTSCC，其保藏编号为CCTCC NO：C201931。进一步的，本发明还提出了所述的牛睾丸支持细胞癌细胞在分离、培养ORFV和GTPV等痘病毒中的应用。该细胞对ORFV和GTPV细胞毒较为敏感，可以高效增殖ORFV和GTPV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞所增殖的病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞(NBSC)相当，且生长速度很快，分种率很高，可以用低血清培养条件下生长。利用该细胞分离、培养ORFV和GTPV病毒可提高试验效率，降低试验成本，同时保证了用其制备的疫苗质量的稳定。本发明的提出对痘病毒的培养及其疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。
-
公开(公告)号：CN109735499A
公开(公告)日：2019-05-10
申请号：CN201910037462.3
申请日：2019-01-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT-NBSC，其保藏编号CCTCC NO：C2018201。试验发现，hTERT-NBSC可以连续传代65代以上，且生长增殖特性保持不变。该细胞系对接种ORFV较为敏感，可以高效增殖ORFV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的ORFV病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞相当，且细胞分种率高于NBSC，分种率可达1:3。同时利用该传代细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊传染性脓疱病疫苗的质量稳定。因此，本发明的提出对羊传染性脓疱病疫苗的规模化生产提供了新的技术手段。
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
14
records
(took 0.027 seconds)
