公开(公告)号：CN107475456A

公开(公告)日：2017-12-15

申请号：CN201710886522.X

申请日：2017-09-27

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 兰喜 ,  王志林 ,  李学瑞 ,  周建华 ,  马丽娜 ,  刘永生

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q2521/507 ,  C12Q2522/101 ,  C12Q2527/101 ,  C12Q2531/113

Abstract: 本发明公开了一种基于等温逆转录重组酶聚合酶扩增法检测猪流行性腹泻病毒的试剂盒，该试剂盒包含引物和探针，引物序列为：上游引物F1020：5′–TCGTGAGCTAGCGGACTCTTACGAGATTAC-3′；下游引物R1160：5′-GCTGCAGCGTGGTTTCACGCTTGTTCTTCT-3′；探针序列为：P1082：5′-ATCCAAATGTTGAGCTTCTTGTTTCACAGG(FAM-dT)G(THF)A(BHQ1-dT)GCATTTAAAACTGGG-C3space-3′；建立了PEDV等温逆转录重组酶聚合酶扩增(RPA)快速检测方法，最低可检测到30Cospies的PEDV RNA，并且该方法最早可在反应开始后4min时检出PEDV，30min内即可完成检测。利用本发明检测50份PEDV阳性乳猪腹泻粪样、100份PEDV阴性乳猪腹泻粪样，检测结果表明与RT-PCR检测结果的符合率为100％。本发明对PEDV特异性强、灵敏度高、耗时短、操作简单、安全可靠。

公开(公告)号：CN103823057B

公开(公告)日：2016-01-20

申请号：CN201410083353.2

申请日：2014-03-07

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 兰喜 ,  杨彬 ,  常晓依 ,  柳纪省 ,  张韵 ,  殷相平 ,  李宝玉 ,  李学瑞 ,  李志勇 ,  方玉萍

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种猪HEV总抗体胶体金快速诊断试纸条及其制备方法，该猪HEV总抗体胶体金快速诊断试纸条包括：吸水玻璃纤维层、硝酸纤维素膜层、吸水滤纸层和白色塑料垫板；该猪HEV总抗体胶体金快速诊断试纸条的制备方法包括以下步骤：制备HEV包被抗原、HEV标记抗原、HEV标记抗原-胶体金；组装胶体金快速诊断试纸条。本发明可以用于猪戊型肝炎病毒总抗体检测，诊断操作简单，检测时间短，携带方便；为戊型肝炎病毒流行病学大规模调查提供相应的研究基础和技术保障；采用双抗原夹心法原理，包被抗原与血清中抗体产生特异性结合，结合抗原抗体复合物与标记抗原再次产生抗原抗体反应，两个抗原结合不同的抗原结合位点，特异性好，灵敏度高。

公开(公告)号：CN103837680B

公开(公告)日：2015-08-26

申请号：CN201410084515.4

申请日：2014-03-07

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 兰喜 ,  杨彬 ,  常晓依 ,  柳纪省 ,  张韵 ,  殷相平 ,  李宝玉 ,  李学瑞 ,  李志勇 ,  方玉萍

IPC: G01N33/576 ,  C12N15/51 ,  C12N15/70 ,  C07K14/08

Abstract: 本发明公开了一种猪HEV总抗体ELISA检测试剂盒的制备方法，该猪HEV总抗体ELISA检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：制备HEV包被抗原；制备HEV标记抗原；HEV标记抗原-HRP标记物的制备；采用碳酸盐缓冲液以一定比例将S抗原稀释，100μl/孔加入到酶标板，封装于加有干燥剂的铝膜袋中，包被完毕。本发明建立了一种快速高效检测猪HEV总抗体ELISA检测方法，本发明依据双抗原夹心法原理，包被抗原与血清中抗体产生特异性结合，结合抗原抗体复合物与标记抗原再次产生抗原抗体反应，两个抗原结合不同的抗原结合位点，灵敏度高，特异性好，重复性好，为戊型肝炎病毒流行病学大规模调查提供相应技术保障，也为更好的预防和控制猪HEV疫病的流行提供了理论依据。

公开(公告)号：CN102925485B

公开(公告)日：2014-07-09

申请号：CN201210474111.7

申请日：2012-11-09

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 柳纪省 ,  杨彬 ,  兰喜 ,  邱燕 ,  殷相平 ,  李学瑞 ,  李宝玉 ,  白银梅 ,  张韵 ,  李志勇 ,  方玉萍

IPC: C12N15/864 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种双表达的AAV重组病毒的制备方法，采用基因克隆技术将合成的特异性PRRSV RNA干扰寡核苷酸序列克隆至AAV Helper Free System中的表达质粒pAAV-U6-IRES-hrGFP的U6启动子下游，将PRRSV的ORF5-6结构蛋白基因克隆至pAAV-U6-IRES-hrGFP的CMV启动子的下游，构建成双效腺相关病毒载体pAAV-U6-IRES-hrGFP-siRNA-ORF5-6，通过酶切及PCR鉴定后进行DNA测序以鉴定重组质粒。实验证实，双效质粒转染靶细胞Marc145，有延迟细胞病变的作用，说明双表达AAV疫苗载体能够转录出siRNA，对病毒的转录复制有一定的抑制效果。

公开(公告)号：CN102392049A

公开(公告)日：2012-03-28

申请号：CN201110326748.7

申请日：2011-10-25

Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所 ,  中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 张志芳 ,  柳纪省 ,  李轶女 ,  易咏竹 ,  兰喜 ,  杨标 ,  王金辉 ,  边大勇 ,  李志勇 ,  吴润 ,  王国增 ,  沈桂芳 ,  舒惠国

IPC: C12N15/866 ,  C07K14/08 ,  A61K39/29 ,  A61P31/14 ,  C12N15/51 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  A61K48/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种制备戊型肝炎病毒空衣壳抗原的方法，包括：将戊型肝炎病毒抗原基因或优化后的戊型肝炎病毒抗原基因分别克隆到杆状病毒运载载体中，构建得到重组杆状病毒转移表达载体；将其与杆状病毒DNA进行共转染，获得重组杆状病毒；将重组杆状病毒感染昆虫宿主或昆虫细胞；诱导重组戊型肝炎病毒抗原表达；收获并纯化所表达的重组抗原，即得。本发明方法采用杆状病毒表达系统在家蚕生物反应器中安全、高效的表达戊型肝炎病毒抗原，所制备的抗原免疫活性高、安全性极高，可直接用于生产注射和口服疫苗用以免疫动物或人。本发明方法可大幅度降低戊型肝炎病毒抗原的生产成本，具有安全、高效、能耗少、成本低等诸多优点。

公开(公告)号：CN101195831A

公开(公告)日：2008-06-11

申请号：CN200710103083.7

申请日：2007-05-28

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 柳纪省 ,  杨彬 ,  兰喜 ,  殷相平 ,  李学瑞 ,  李宝玉 ,  韩晓荣 ,  李志勇 ,  刘兆弼 ,  方玉萍

IPC: C12N15/63 ,  A61K48/00 ,  A61P31/12

CPC classification number: A61K39/135 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/5258 ,  A61K2039/53 ,  A61K2039/552 ,  C12N15/1131 ,  C12N2310/11 ,  C12N2310/111 ,  C12N2770/32134 ,  C12N2830/20 ,  C12N2840/203

Abstract: 本发明公开了一种口蹄疫病毒双效疫苗载体以及该双效疫苗载体的构建方法和用途。本发明口蹄疫病毒双效疫苗载体主要由双顺反子表达载体序列组成，其中含有能够与口蹄疫病毒基因组5’非编码区RNA结合的反义基因序列和完整的口蹄疫病毒VP1结构蛋白基因序列。动物试验表明，本发明口蹄疫病毒双效疫苗在动物口蹄疫的防制方面具有基因治疗及基因免疫双重功效。

公开(公告)号：CN1323718C

公开(公告)日：2007-07-04

申请号：CN200410008926.1

申请日：2004-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 柳纪省 ,  殷相平 ,  黄银君 ,  白银梅 ,  牟克斌 ,  李宝玉 ,  杨联 ,  李志勇 ,  王辉 ,  兰喜 ,  张兴旺

IPC: A61K39/39 ,  A61K39/002 ,  A61K39/12 ,  A61P31/04 ,  A61P31/12

Abstract: 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)制作抗原剂，将制苗毒(菌)株用敏感细胞或培养基复制，灭活后，获得抗原；并将所述的抗原制成抗原剂；(2)制作植物油佐剂；(3)混匀，将所述的抗原剂按比例与所述的植物油佐剂混合，均质，制成疫苗。所述的抗原剂为抗原与灭菌的吐温-80混合物；所述的植物油佐剂为植物油与司盘-80的混合物。本发明采用新型佐剂来制备动物病毒性、细菌性疫苗，使其应用时，既不影响疫苗的免疫效力，又能降低疫苗的不良反应，同时又有利于生产安全的食品肉类；与现有技术相比，具有明显的优点。本发明适于各种动物病毒性、细菌性疫苗使用。

公开(公告)号：CN1669584A

公开(公告)日：2005-09-21

申请号：CN200410008926.1

申请日：2004-03-15

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 柳纪省 ,  殷相平 ,  黄银君 ,  白银梅 ,  牟克斌 ,  李宝玉 ,  杨联 ,  李志勇 ,  王辉 ,  兰喜 ,  张兴旺

IPC: A61K39/39 ,  A61K39/002 ,  A61K39/12 ,  A61P31/04 ,  A61P31/12

Abstract: 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)制作抗原剂，将制苗毒(菌)株用敏感细胞或培养基复制，灭活后，获得抗原；并将所述的抗原制成抗原剂；(2)制作植物油佐剂；(3)混匀，将所述的抗原剂按比例与所述的植物油佐剂混合，均质，制成疫苗。所述的抗原剂为抗原与灭菌的吐温－80混合物；所述的植物油佐剂为植物油与司盘－80的混合物。本发明采用新型佐剂来制备动物病毒性、细菌性疫苗，使其应用时，既不影响疫苗的免疫效力，又能降低疫苗的不良反应，同时又有利于生产安全的食品肉类；与现有技术相比，具有明显的优点。本发明适于各种动物病毒性、细菌性疫苗使用。

公开(公告)号：CN114895027B

公开(公告)日：2025-04-08

申请号：CN202210523485.7

申请日：2022-05-13

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 何继军 ,  吴锦艳 ,  尚佑军 ,  田宏 ,  曹小安 ,  马维民 ,  兰喜 ,  李玲霞 ,  杜国玉 ,  张成 ,  孙健飞

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  C07K16/10 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑①免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑①通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑①免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑①蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。

公开(公告)号：CN111808858B

公开(公告)日：2023-04-28

申请号：CN202010663216.1

申请日：2020-07-10

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 兰喜 ,  李学瑞 ,  王志林 ,  杨彬 ,  吴锦艳 ,  曹小安 ,  尚佑军 ,  刘永生

IPC: C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明公开了两个siRNA序列及其靶标基因序列，通过siRNA对Vero‑E6培养细胞内si‑LNC_002015基因的两个靶点进行干扰，使得Vero‑E6培养细胞内PEDV RNA拷贝数和蛋白表达量与对照相比明显升高，毒价提升。