猪血凝性脑脊髓炎病毒全长感染性克隆质粒及其构建方法与应用

    公开(公告)号:CN117887762A

    公开(公告)日:2024-04-16

    申请号:CN202410091956.0

    申请日:2024-01-23

    申请人: 吉林大学

    摘要: 猪血凝性脑脊髓炎病毒全长感染性克隆质粒及其构建方法与应用,属于遗传平台技术领域。本发明的构建方法,先消除PBeloBAC11载体上的两个KpnI酶切位点,然后在pBeloBAC11的5'末端引入人巨细胞病毒启动子和猪血凝性脑脊髓炎病毒5'UTR,在pBeloBAC11的3'末端引入猪血凝性脑脊髓炎病毒3'UTR、PolyA、丁型肝炎病毒核酶序列以及牛生长素,并插入多克隆酶切位点,得到修饰的pBeloBAC11载体;再采用八个酶切位点将猪血凝性脑脊髓炎病毒全基因组分割为五个基因片段,并扩增,最后将扩增后的基因片段连接至修饰的pBeloBAC11载体上。该克隆质粒可作为反向遗传平台。

    绿海龟丙肝病毒全基因组序列及其检测方法

    公开(公告)号:CN116064418A

    公开(公告)日:2023-05-05

    申请号:CN202211335198.X

    申请日:2022-10-28

    摘要: 本发明提供了绿海龟丙肝病毒的全基因组序列及其检测方法,病毒全基因组序列全长为9430bp,GC含量为45%,此病毒基因组含有一个长的ORF,核苷酸位置在517‑9048,该ORF编码的前体多聚蛋白全长2843aa。绿海龟丙肝病毒全基因组序列、ORF序列及编码蛋白氨基酸序列如SEQ IDNO:1‑NO:3所示。根据病毒的全基因组序列设计出10对引物及1组引物探针分别用于普通RT‑PCR和荧光定量RT‑PCR检测,两种方法均具有较好的特异性和可靠的检测结果。本发明所提供的检测方法可为绿海龟丙肝病毒的深入研究及病害流行病学调研打下坚实的基础,也可规范绿海龟放生行为,改善海洋生态环境。

    一株NADC34-like猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作平台的构建与应用

    公开(公告)号:CN115992100A

    公开(公告)日:2023-04-21

    申请号:CN202210804949.1

    申请日:2022-07-08

    申请人: 扬州大学

    摘要: 本发明涉及一株NADC34‑like PRRSV2的反向遗传操作构建的病毒。具体包括以pACY177质粒为载体,利用PCR扩增、酶切连接等方法将NADC34‑like PRRSV2 BJ1805‑2分离株的全基因序列分段连接到载体上,获得BJ1805‑2全长感染性克隆重组质粒(rBJ1805‑2)。体外拯救了感染性克隆病毒rBJ1805‑2,成功搭建了我国首个NADC34‑like PRRSV2毒株感染性克隆平台。本发明还涉及一种构建可适应Marc‑145细胞传代培养NADC34‑like PRRSV2毒株的改造方法。本发明所构建的感染性克隆病毒有良好的体内外增殖效力,接种猪体可以引起特异性病毒血症;具有良好的安全性,接种猪体后不引起发热,更不会引起仔猪死亡。所改造毒株可作为候选毒株用于研制我国首个NADC34‑like PRRSV2特异性疫苗,有利于我国PRRSV疫情的防控。

    一种乙肝病毒表面蛋白突变体及其在抗乙肝病毒中的应用

    公开(公告)号:CN113201051B

    公开(公告)日:2022-08-02

    申请号:CN202110460186.9

    申请日:2021-04-27

    申请人: 复旦大学

    摘要: 本发明涉及一种乙肝病毒表面蛋白突变体,具体为S蛋白突变体,其能够抑制乙肝病毒(HBV)复制和/或抑制表面抗原(HBsAg)表达及分泌,本发明还涉及与上述S蛋白突变体相关的生物材料及其在抗HBV中的应用。本发明在体外试验中发现S‑L13R/E/D/K突变体可以在Huh7细胞中抑制HBV的复制,抑制HBsAg的表达和分泌;且在Adv/prcccDNA乙肝慢性化小鼠模型中,实现血液HBsAg转阴,在血液中可出现表面抗体HBsAb,HBeAg水平和血清中HBV DNA水平也实现转阴,并且在转阴过程中没有引起明显的ALT上升,证明了其安全性,S蛋白突变体对不同基因型HBV的HBsAg的分泌、不同基因型S蛋白突变体对同一基因型HBV的HBsAg的分泌均具有显著影响,这为临床治疗慢性化乙肝提供了新的方法。

    用于制备HBV cccDNA的核酸、载体和宿主细胞

    公开(公告)号:CN114686496A

    公开(公告)日:2022-07-01

    申请号:CN202011615935.2

    申请日:2020-12-30

    发明人: 李锋 冯成千

    IPC分类号: C12N15/51 C12N15/85 C12N5/10

    摘要: 本发明涉及一种用于制备HBV cccDNA的核酸、载体和宿主细胞。该用于制备HBV cccDNA的核酸包括第一节段和与所述第一节段连接的第二节段,第一节段和第二节段各自独立转录,第一节段包括编码核心蛋白的Core基因、编码HBV聚合酶的Pol基因和编码HBx的X基因,第二节段包括与前基因组RNA对应的核酸片段和与起始密码子对应的核酸片段,与起始密码子对应的核酸片段位于与前基因组RNA对应的核酸片段的转录方向的3’端,在第二节段中,与起始密码子对应的核酸片段仅有一个,核酸不含编码HBs蛋白的S基因的表达框。上述用于制备HBV cccDNA的核酸能够提高cccDNA的生产效率。