一种新型冠状病毒SARS-CoV-2复制子及其细胞模型、构建方法和应用

    公开(公告)号:CN115029380B

    公开(公告)日:2023-11-28

    申请号:CN202210531625.5

    申请日:2022-05-16

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明构建了一种新型冠状病毒SARS‑CoV‑2复制子及其细胞模型,其通过克隆SARS‑CoV‑2基因组的DNA编码序列,删除病毒棘突蛋白基因,并以荧光素酶报告基因置换病毒核衣壳蛋白基因部分序列,在病毒基因组5’和3’末端分别插入CMV启动子和HDVRZ序列,在NSP1基因特定位点插入外源嵌合序列,构建转录模件;在转录模件两侧分别插入绝缘子及转座元件序列。通过设计Cre/LoxP介导DNA重组以及内含子RNA拼接,实现外源基因序列在SARS‑CoV‑2基因组无缝插入;通过PiggyBac转座策略,将完整转录模件整合至宿主细胞染色质,筛选获得稳定的病毒复制子细胞模型,其能够诱导重组病毒RNA自主复制和报告基因表达,可广泛应用于抗SARS‑CoV‑2药物筛选及评价,也为深入的基础病毒学研究提供平台。

    一种乙肝病毒表面蛋白突变体及其在抗乙肝病毒中的应用

    公开(公告)号:CN113201051B

    公开(公告)日:2022-08-02

    申请号:CN202110460186.9

    申请日:2021-04-27

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明涉及一种乙肝病毒表面蛋白突变体,具体为S蛋白突变体,其能够抑制乙肝病毒(HBV)复制和/或抑制表面抗原(HBsAg)表达及分泌,本发明还涉及与上述S蛋白突变体相关的生物材料及其在抗HBV中的应用。本发明在体外试验中发现S‑L13R/E/D/K突变体可以在Huh7细胞中抑制HBV的复制,抑制HBsAg的表达和分泌;且在Adv/prcccDNA乙肝慢性化小鼠模型中,实现血液HBsAg转阴,在血液中可出现表面抗体HBsAb,HBeAg水平和血清中HBV DNA水平也实现转阴,并且在转阴过程中没有引起明显的ALT上升,证明了其安全性,S蛋白突变体对不同基因型HBV的HBsAg的分泌、不同基因型S蛋白突变体对同一基因型HBV的HBsAg的分泌均具有显著影响,这为临床治疗慢性化乙肝提供了新的方法。

    一种抑制人乙型肝炎病毒感染的短肽及其应用

    公开(公告)号:CN102775470A

    公开(公告)日:2012-11-14

    申请号:CN201110122517.4

    申请日:2011-05-12

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于生物医药领域,涉及一种能抑制人乙型肝炎病毒感染细胞的短肽,该短肽包含以下氨基酸序列中的任意一种:1)N-亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-异亮氨酸-精氨酸-C;2)1)中所示氨基酸序列中有1-2个氨基酸缺失且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列;3)1)中所示氨基酸序列中有1-2个氨基酸被替代且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列;4)1)中所示氨基酸序列中有1个或多个氨基酸插入且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列;5)1)-4)中所示氨基酸序列重复拼接且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列。本发明还提供了包括该短肽的氨基酸序列或者核酸编码序列的构建物和细胞及其应用。

    一种表达绿色荧光蛋白分裂肽的重组乙型肝炎病毒复制子及其构建方法

    公开(公告)号:CN114686449A

    公开(公告)日:2022-07-01

    申请号:CN202011623276.7

    申请日:2020-12-31

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术及基因工程技术领域,涉及一种表达绿色荧光蛋白GFP分裂肽(split peptide)的重组人乙型肝炎病毒(rHBV/GFPc)复制子及其构建方法。本发明还公开了一种内含肽(intein)介导的GFP分裂肽高效拼接的方法。本发明中,在乙肝病毒(HBV)基因组核心蛋白(HBc)编码区删除部分序列,并插入增强绿色荧光蛋白EGFP碳端分裂肽C11(EGFPC11)编码序列,构建一种重组HBV(rHBV)复制子系统。rHBV/EGFPc11为一种缺陷病毒,能够在HBc互补条件下实现功能性复制,并表达EGFPC11,在细胞中能与超级折叠绿色荧光蛋白sfGFP氮端分裂肽(sfGFPN1‑10),通过内含肽实现高效拼接,形成完整的功能性荧光蛋白。本发明能应用于HBV感染性细胞克隆的筛选,并能广泛用于HBV抗病毒药物的筛选和评价,具有重要的病毒学意义和应用前景。

    一种抑制人乙型肝炎病毒感染的短肽及其应用

    公开(公告)号:CN102775470B

    公开(公告)日:2014-09-03

    申请号:CN201110122517.4

    申请日:2011-05-12

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于生物医药领域,涉及一种能抑制人乙型肝炎病毒感染细胞的短肽,该短肽包含以下氨基酸序列中的任意一种:1)N-亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-异亮氨酸-精氨酸-C;2)1)中所示氨基酸序列中有1-2个氨基酸缺失且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列;3)1)中所示氨基酸序列中有1-2个氨基酸被替代且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列;4)1)中所示氨基酸序列中有1个或多个氨基酸插入且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列;5)1)-4)中所示氨基酸序列重复拼接且能抑制人乙型肝炎病毒感染的氨基酸序列。本发明还提供了包括该短肽的氨基酸序列或者核酸编码序列的构建物和细胞及其应用。

    加强型二级生物安全实验室智能一体化管理系统

    公开(公告)号:CN119762009A

    公开(公告)日:2025-04-04

    申请号:CN202411876349.1

    申请日:2024-12-19

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明公开了加强型二级生物安全实验室智能一体化管理系统,包括控制终端、系统登录模块、系统设置模块、用户管理模块、项目管理模块、实验室管理模块、动物房管理模块、仪器设备管理模块、项目统计模块和日志管理模块。本发明是一款高效、便捷、专业的系统管理操作的软件,用于生物安全实验室项目管理、实验室预约使用、实验人员管理、实验动物及笼位管理、实验室设施设备及耗材管理等,实现智能化、数字化、全流程一体化管理。

    HLA-A*02:01限制性SARS-CoV-2 T细胞表位肽及其应用

    公开(公告)号:CN117964720A

    公开(公告)日:2024-05-03

    申请号:CN202311833380.2

    申请日:2023-12-28

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明涉及HLA‑A*02:01限制性SARS‑CoV‑2T细胞表位肽及其应用。本发明利用免疫信息学方法并使用IFN‑γELISPOT方法体外筛选获得HLA‑A*02:01限制性CTL表位肽,同时在B‑HLA‑A2.1小鼠模型中进行候选疫苗表位的筛选验证。本发明最终筛选出12个表位肽N1‑N4和A1‑A8,成功构建DNA候选疫苗pCMV‑4‑N1‑N4和pCMV‑8‑A1‑A8,并在B‑HLA‑A2.1小鼠模型中进行免疫和攻毒保护验证;其中A1、A2、A3、A4和N2表位肽段在B‑HLA‑A2.1小鼠模型中显示出良好的免疫原性和保守性。本发明涉及的与DNA疫苗免疫后小鼠攻毒相关的结果,揭示了基于预测和初步测试的表位肽段具有HLA‑A*02:01限制性免疫原性,并能诱导明显的保护性免疫应答,有望为新型COVID‑19疫苗的开发提供候选物。

    番茄碱在抗肝炎病毒中的应用
    8.
    发明公开

    公开(公告)号:CN117797157A

    公开(公告)日:2024-04-02

    申请号:CN202311870175.3

    申请日:2023-12-29

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明提供了番茄碱在抗肝炎病毒中的应用。本发明首次发现了一种新型抗肝炎病毒的物质‑番茄碱(Tomatidine),其可抑制乙肝病毒进入,且在一定程度上能降低乙肝病毒的复制,结合细胞毒性实验结果,在病毒抑制浓度下的Tomatidine对机体几乎不会产生不良反应。上述番茄碱可靶向HBV生命周期不同阶段,符合临床上联合用药进行抗病毒治疗的思路。

    一种乙肝病毒表面蛋白突变体及其在抗乙肝病毒中的应用

    公开(公告)号:CN113201051A

    公开(公告)日:2021-08-03

    申请号:CN202110460186.9

    申请日:2021-04-27

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明涉及一种乙肝病毒表面蛋白突变体,具体为S蛋白突变体,其能够抑制乙肝病毒(HBV)复制和/或抑制表面抗原(HBsAg)表达及分泌,本发明还涉及与上述S蛋白突变体相关的生物材料及其在抗HBV中的应用。本发明在体外试验中发现S‑L13R/E/D/K突变体可以在Huh7细胞中抑制HBV的复制,抑制HBsAg的表达和分泌;且在Adv/prcccDNA乙肝慢性化小鼠模型中,实现血液HBsAg转阴,在血液中可出现表面抗体HBsAb,HBeAg水平和血清中HBV DNA水平也实现转阴,并且在转阴过程中没有引起明显的ALT上升,证明了其安全性,S蛋白突变体对不同基因型HBV的HBsAg的分泌、不同基因型S蛋白突变体对同一基因型HBV的HBsAg的分泌均具有显著影响,这为临床治疗慢性化乙肝提供了新的方法。

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