公开(公告)号：CN112646783A

公开(公告)日：2021-04-13

申请号：CN202011626448.6

申请日：2020-12-30

申请人： 广州市第八人民医院 ,  广州福榕生物科技有限公司

发明人： 李锋 ,  王亚萍 ,  冯成千 ,  李贤

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及一种表达基因、经基因修饰的受精卵的构建方法和小鼠模型的构建方法，该经基因修饰的受精卵的构建方法包括以下步骤：利用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术，在小鼠的干扰素受体基因上，敲入表达人干扰素受体的表达基因，制备经基因修饰的受精卵。采用上述构建方法制得的受精卵制得的小鼠模型可以识别人干扰素，正常应答人干扰素的刺激。

公开(公告)号：CN111705080A

公开(公告)日：2020-09-25

申请号：CN202010407286.0

申请日：2020-05-14

申请人： 广州市第八人民医院

发明人： 李锋 ,  冯成千

IPC分类号： C12N15/861 ,  C12N15/62 ,  C12N15/89 ,  A01K67/027

摘要： 本发明涉及一种HBV非人动物模型的构建方法及其应用。包括：构建转入第一融和基因片段和第二融和基因片段的转基因动物，其中：第一融和基因片段含有诱导型反应元件、启动子、入核信号以及位点特异性重组酶，诱导型反应元件能够在诱导剂存在的条件下使得位点特异性重组酶入核表达；第二融和基因片段含有HBV基因和报告基因，报告基因分为两段，分别与HBV基因的N端和C端融合，第二融和基因片段的两端还分别设置有位点特异性重组酶的识别位点，在位点特异性重组酶的作用下，第二融和基因片段能够环化，并使得报告基因的两段融合为完整的活性片段；当转基因动物体内注射诱导剂时，能够产生HBV cccDNA。

公开(公告)号：CN107475444A

公开(公告)日：2017-12-15

申请号：CN201710661443.9

申请日：2017-08-04

申请人： 广州市第八人民医院

发明人： 李锋 ,  高鸣 ,  冯成千

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

CPC分类号： C12Q1/6851 ,  C12Q1/706 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2561/101

摘要： 本发明提供了一种从乙型肝炎病毒总核酸中选择性扩增RNA的PCR引物、试剂盒和方法。采用该PCR引物可以广谱检测所有基因型HBV病毒中的RNA，该PCR引物与探针组合可以保证在HBV DNA与RNA基因组混合核酸中选择性地只针对HBV RNA进行特异性扩增，并且适用于所有基因型，具有广谱扩增的特性。用于RNA检测中，提取的HBV总核酸可以直接用于检测，无需进行DNaseI消化以降解其中的DNA。

公开(公告)号：CN114686496B

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202011615935.2

申请日：2020-12-30

申请人： 广州市第八人民医院

发明人： 李锋 ,  冯成千

IPC分类号： C12N15/51 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

摘要： 本发明涉及一种用于制备HBV cccDNA的核酸、载体和宿主细胞。该用于制备HBV cccDNA的核酸包括第一节段和与所述第一节段连接的第二节段，第一节段和第二节段各自独立转录，第一节段包括编码核心蛋白的Core基因、编码HBV聚合酶的Pol基因和编码HBx的X基因，第二节段包括与前基因组RNA对应的核酸片段和与起始密码子对应的核酸片段，与起始密码子对应的核酸片段位于与前基因组RNA对应的核酸片段的转录方向的3’端，在第二节段中，与起始密码子对应的核酸片段仅有一个，核酸不含编码HBs蛋白的S基因的表达框。上述用于制备HBV cccDNA的核酸能够提高cccDNA的生产效率。

公开(公告)号：CN110669735A

公开(公告)日：2020-01-10

申请号：CN201910524757.3

申请日：2019-06-18

申请人： 广州市第八人民医院

发明人： 李锋 ,  冯成千

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/52 ,  C12N15/36 ,  C12N15/867 ,  C12N15/65 ,  C12Q1/02 ,  C12Q1/66 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了用于诱导形成HBV cccDNA的系统及构建方法，本发明通过整合Phic31重组酶基因构建成稳定细胞系，而线性HBV的5’端和3’端带有互补的荧光素酶基因片段和Phic31重组酶识别的特异性位点，在Phic31重组酶的作用下，环化形成cccDNA，同时，互补的荧光素酶也随之表达；荧光素酶提供了快速检测活动性HBV cccDNA的快捷方式，适用于高通量筛选。

公开(公告)号：CN114686496A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202011615935.2

申请日：2020-12-30

申请人： 广州市第八人民医院

发明人： 李锋 ,  冯成千

IPC分类号： C12N15/51 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

摘要： 本发明涉及一种用于制备HBV cccDNA的核酸、载体和宿主细胞。该用于制备HBV cccDNA的核酸包括第一节段和与所述第一节段连接的第二节段，第一节段和第二节段各自独立转录，第一节段包括编码核心蛋白的Core基因、编码HBV聚合酶的Pol基因和编码HBx的X基因，第二节段包括与前基因组RNA对应的核酸片段和与起始密码子对应的核酸片段，与起始密码子对应的核酸片段位于与前基因组RNA对应的核酸片段的转录方向的3’端，在第二节段中，与起始密码子对应的核酸片段仅有一个，核酸不含编码HBs蛋白的S基因的表达框。上述用于制备HBV cccDNA的核酸能够提高cccDNA的生产效率。