公开(公告)号：CN117384965A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202311148823.4

申请日：2023-09-07

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 任善会 ,  孙跃峰 ,  殷相平 ,  陈豪泰 ,  王相伟 ,  王莎莎

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/64 ,  C12N15/54 ,  C12N7/01 ,  A61K39/275 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供牛结节性皮肤病病毒TK基因缺失毒株LSDV‑△TK的构建方法，包括以下步骤：构建缺失TK基因的pUC19T‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK转移载体；构建绿色荧光标记毒株LSDV‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK；利用Cre‑LoxP重组酶系统，构建TK基因缺失毒株LSDV‑△TK。本发明采用同源重组技术将LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP基因表达框定向插入LSDV毒株的病毒基因组TK基因处，构建绿色荧光标记毒株LSDV‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK，采用Cre‑Loxp重组酶系统，将EGFP标签切除，构建LSDV‑△TK。

公开(公告)号：CN112877275B

公开(公告)日：2023-03-31

申请号：CN202110154125.X

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  龚青 ,  侯石桐 ,  殷相平 ,  王相伟 ,  毛箬青

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/55 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/02 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明公开了HDAC2基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC2进行基因敲除；发明人将用于敲除HDAC2的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆；提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了1个HDAC2基因发生纯合移码突变的细胞克隆；其中HDAC2‑KO‑B3在Cas9预定切割位置处有1个碱基的缺失。HDAC2敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC2敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC2，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN109943576A

公开(公告)日：2019-06-28

申请号：CN201910309372.5

申请日：2019-04-17

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 殷相平 ,  张志东 ,  张韵 ,  卫巧林 ,  刘翠 ,  殷娟强 ,  周亚花

IPC: C12N15/45 ,  C12N7/01 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  A61K39/295 ,  A61K39/205 ,  A61K39/175 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了嵌合犬瘟热病毒主要免疫基因的重组狂犬病病毒BNSP-CDV-F和BNSP-CDV-H。该重组病毒是以狂犬病病毒SAD-B19株为骨架，将SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的CDV-F和CDV-H基因分别插入重组质粒SAD-19全长cDNA的N基因和P基因之间，最后通过反向遗传操作技术，拯救出重组狂犬病病毒株BNSP-CDV-F和BNSP-CDV-H。上述重组病毒BNSP-CDV-F和BNSP-CDV-H可表达犬瘟热病毒的融合蛋白和血凝素蛋白，将上述重组病毒混合制备的疫苗免疫动物后，能诱导产生较高的抗狂犬病病毒抗体与抗犬瘟热病毒主要免疫基因抗体，还可以降低疫苗成本，具有很好的推广应用前景。

公开(公告)号：CN103823057A

公开(公告)日：2014-05-28

申请号：CN201410083353.2

申请日：2014-03-07

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 兰喜 ,  杨彬 ,  常晓依 ,  柳纪省 ,  张韵 ,  殷相平 ,  李宝玉 ,  李学瑞 ,  李志勇 ,  方玉萍

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543

CPC classification number: G01N33/5767 ,  G01N33/536 ,  G01N33/56983

Abstract: 本发明公开了一种猪HEV总抗体胶体金快速诊断试纸条及其制备方法，该猪HEV总抗体胶体金快速诊断试纸条包括：吸水玻璃纤维层、硝酸纤维素膜层、吸水滤纸层和白色塑料垫板；该猪HEV总抗体胶体金快速诊断试纸条的制备方法包括以下步骤：制备HEV包被抗原、HEV标记抗原、HEV标记抗原-胶体金；组装胶体金快速诊断试纸条。本发明可以用于猪戊型肝炎病毒总抗体检测，诊断操作简单，检测时间短，携带方便；为戊型肝炎病毒流行病学大规模调查提供相应的研究基础和技术保障；采用双抗原夹心法原理，包被抗原与血清中抗体产生特异性结合，结合抗原抗体复合物与标记抗原再次产生抗原抗体反应，两个抗原结合不同的抗原结合位点，特异性好，灵敏度高。

公开(公告)号：CN101307317B

公开(公告)日：2012-01-11

申请号：CN200810127520.3

申请日：2008-06-25

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 ,  中国农业科学院生物技术研究所

Inventor： 柳纪省 ,  张志芳 ,  殷相平 ,  易咏竹 ,  李江涛 ,  李轶女 ,  李志勇 ,  张韵 ,  李宝玉 ,  李学瑞 ,  杨彬 ,  兰喜 ,  白银梅 ,  沈桂芳 ,  舒惠国

IPC: C12N15/47 ,  C12N15/866 ,  C07K14/145 ,  A61K39/205 ,  A61K47/12 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供了一种制备狂犬病毒抗原的方法，包括：将狂犬病毒的抗原基因或抗原基因的联合表达组合分别克隆到杆状病毒运载载体中，得到转移表达载体；将转移表达载体与杆状病毒进行共转染以发生同源重组或转座，获得重组杆状病毒；用重组杆状病毒感染昆虫宿主和细胞；培养被感染的昆虫宿主表达相应的狂犬病抗原；收获并纯化所表达的抗原，即得。本发明方法采用杆状病毒表达系统在家蚕生物反应器中生产安全、高效的狂犬病毒抗原，由于所制备的抗原安全性极高，可直接用于生产注射和口服疫苗用以免疫动物。本发明方法可以大幅度降低狂犬病抗原的生产成本，具有安全、高效、能耗少、成本低等诸多优点。

公开(公告)号：CN101121938B

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN200710090035.9

申请日：2007-03-23

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 ,  中国农业科学院生物技术研究所

Inventor： 柳纪省 ,  张志芳 ,  李志勇 ,  易咏竹 ,  殷相平 ,  白银梅 ,  李轶女 ,  李宝玉 ,  李学瑞 ,  杨彬 ,  兰喜 ,  沈桂芳

IPC: C12N15/42 ,  C12N15/866 ,  C12N7/01 ,  C07K14/09

CPC classification number: C07K14/005 ,  A61K39/00 ,  C12N2710/14143 ,  C12N2770/32122

Abstract: 本发明提供了一种利用重组杆状病毒在昆虫体内表达口蹄疫抗原的方法，包括：将口蹄疫不同的基因组合分别克隆到杆状病毒运载载体中，构建得到转移载体；用所构建的转移载体转染杆状病毒进行DNA重组，获得重组杆状病毒；将重组杆状病毒感染昆虫宿主；培养被感染的昆虫宿主使其进行口蹄疫抗原表达；收集并纯化所表达的口蹄疫抗原。本发明方法采用杆状病毒表达系统在家蚕生物反应器中安全、高效的生产口蹄疫抗原，所制备的抗原安全性极高，可直接制作疫苗免疫动物。本发明制备口蹄疫抗原的方法无需投资建厂，无三废，电力和水资源等能源消耗极少，其生产成本也显著低于传统制备口蹄疫抗原的方法，，具有安全、高效、能耗少、成本低等诸多优点。

公开(公告)号：CN1651080A

公开(公告)日：2005-08-10

申请号：CN200410039540.7

申请日：2004-02-05

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 柳纪省 ,  殷相平 ,  白银梅 ,  胡永浩 ,  李志勇 ,  张兴旺 ,  王辉 ,  兰喜 ,  李宝玉 ,  刘兆弼

IPC: A61K39/205 ,  A61P31/14 ,  C12N15/861 ,  C12N15/09

Abstract: 一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒双基因制备狂犬病活载体疫苗的方法，包括如下过程：一、制备目的基因：设计引物，扩增出狂犬病病毒(rabies virus，RV)抗原蛋白G基因与N基因；二、构建腺病毒穿梭载体：将抗原蛋白G基因与N基因插入到复制缺陷型腺病毒穿梭载体特异性启动子和终止子之间，构建成含有融合基因(G+N)的腺病毒穿梭载体(pAdTrack－CMV/G+N)；三、获得腺病毒质粒：将获得的重组复制缺陷型腺病毒穿梭载体(pAdTrack－CMV/G+N)与腺病毒骨架载体(pAdEasy－1)通过同源重组得到重组腺病毒质粒；四、用重组腺病毒质粒产生基因组结构均一的重组腺病毒，将重组腺病毒制成狂犬病活载体疫苗。本发明较之现有狂犬病疫苗更为安全和有效，制作周期较短。

公开(公告)号：CN114807195B

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202210405602.X

申请日：2022-04-18

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 殷相平 ,  殷娟斌 ,  王相伟 ,  毛箬青 ,  任善会 ,  孙跃峰

IPC: C12N15/62 ,  C12N7/01 ,  C12N15/47 ,  C12N15/66 ,  A61K39/205 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种提高狂犬病病毒耐热稳定性和免疫效果的融合基因、重组狂犬病病毒及其应用，属于病毒技术领域。以狂犬病病毒SAD B19株为骨架，在基因组N与P基因之间插入矿化基因W6和G基因形成的融合基因，构建得到重组全长质粒pBNSP‑RV‑GW6和pBNSP‑RV‑W6G，并利用狂犬病的反向遗传操作系统拯救出含矿化基因和双G基因的重组狂犬病病毒。所述重组狂犬病病毒在细胞上稳定增殖，具有耐热稳定特性，免疫小鼠可以诱导产生较高的狂犬病病毒特异性抗体，能抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击，同时具有耐热稳定和高效免疫效果，可以直接作为疫苗应用，具有较高的应用前景。

公开(公告)号：CN117431269A

公开(公告)日：2024-01-23

申请号：CN202311219097.0

申请日：2023-09-21

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 殷相平 ,  马小琴 ,  孙跃峰 ,  任善会 ,  王相伟 ,  王莎莎 ,  陈豪泰

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N7/00 ,  A61K39/275 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供牛结节性皮肤病病毒基因缺失毒株的构建方法，包括以下步骤：根据牛结节性皮肤病病毒LSDV基因序列设计左右同源臂的上下游引物；构建转移载体pUC57‑LSDVΔORF005‑008‑EGFP质粒；利用同源重组方法，构建牛结节性皮肤病病毒LSDV ORF005‑008基因缺失毒株。本发明通过IFN‑β双荧光素酶报告基因系统初步筛选出LSDV ORF006和LSDV ORF008蛋白具有抑制宿主天然免疫的功能，通过同源重组方法构建了rLSDVΔORF005‑008四基因缺失的重组病毒，该重组病毒能稳定传代，具有进一步试制新型疫苗的潜力。

公开(公告)号：CN112980878B

公开(公告)日：2023-03-31

申请号：CN202110154123.0

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  侯石桐 ,  毛箬青 ,  张会军 ,  殷相平 ,  赵帅阳

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/02 ,  C12Q1/06 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了HDAC8基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC8进行基因敲除，将用于敲除HDAC8的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了2个HDAC8基因发生纯合移码突变的细胞克隆。HDAC8敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC8敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC8，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。