公开(公告)号：CN112877275B

公开(公告)日：2023-03-31

申请号：CN202110154125.X

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  龚青 ,  侯石桐 ,  殷相平 ,  王相伟 ,  毛箬青

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/55 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/02 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明公开了HDAC2基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC2进行基因敲除；发明人将用于敲除HDAC2的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆；提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了1个HDAC2基因发生纯合移码突变的细胞克隆；其中HDAC2‑KO‑B3在Cas9预定切割位置处有1个碱基的缺失。HDAC2敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC2敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC2，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN112980878A

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN202110154123.0

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  侯石桐 ,  毛箬青 ,  张会军 ,  殷相平 ,  赵帅阳

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/02 ,  C12Q1/06 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了HDAC8基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC8进行基因敲除，将用于敲除HDAC8的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了2个HDAC8基因发生纯合移码突变的细胞克隆。HDAC8敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC8敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC8，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN112852745A

公开(公告)日：2021-05-28

申请号：CN202110155151.4

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 侯石桐 ,  孙跃峰 ,  王相伟 ,  殷相平 ,  毛箬青 ,  赵帅阳

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  G01N33/569 ,  G01N21/31 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了HDAC3基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC3进行基因敲除，将用于敲除HDAC3的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了2个HDAC3基因发生纯合移码突变的细胞克隆。HDAC3敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC3敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC3，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN112852874B

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202110155142.5

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  龚青 ,  侯石桐 ,  赵帅阳 ,  殷相平 ,  王相伟 ,  王光祥

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了HDAC5基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC5进行基因敲除，将用于敲除HDAC5的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了1个HDAC5基因发生纯合移码突变的细胞克隆，其中HDAC5‑KO‑A2在Cas9预定切割位置处有13个碱基的缺失。HDAC5敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC5敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC5，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN112852745B

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202110155151.4

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 侯石桐 ,  孙跃峰 ,  王相伟 ,  殷相平 ,  毛箬青 ,  赵帅阳

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  G01N33/569 ,  G01N21/31 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了HDAC3基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC3进行基因敲除，将用于敲除HDAC3的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了2个HDAC3基因发生纯合移码突变的细胞克隆。HDAC3敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC3敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC3，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN112980878B

公开(公告)日：2023-03-31

申请号：CN202110154123.0

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  侯石桐 ,  毛箬青 ,  张会军 ,  殷相平 ,  赵帅阳

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/02 ,  C12Q1/06 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了HDAC8基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC8进行基因敲除，将用于敲除HDAC8的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了2个HDAC8基因发生纯合移码突变的细胞克隆。HDAC8敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC8敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC8，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN112877275A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110154125.X

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  龚青 ,  侯石桐 ,  殷相平 ,  王相伟 ,  毛箬青

IPC: C12N5/071 ,  C12N15/55 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/02 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明公开了HDAC2基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC2进行基因敲除；发明人将用于敲除HDAC2的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆；提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了1个HDAC2基因发生纯合移码突变的细胞克隆；其中HDAC2‑KO‑B3在Cas9预定切割位置处有1个碱基的缺失。HDAC2敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC2敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC2，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN112852874A

公开(公告)日：2021-05-28

申请号：CN202110155142.5

申请日：2021-02-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙跃峰 ,  龚青 ,  侯石桐 ,  赵帅阳 ,  殷相平 ,  王相伟 ,  王光祥

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N5/10 ,  C12N7/00 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了HDAC5基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC5进行基因敲除，将用于敲除HDAC5的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了1个HDAC5基因发生纯合移码突变的细胞克隆，其中HDAC5‑KO‑A2在Cas9预定切割位置处有13个碱基的缺失。HDAC5敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC5敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC5，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。