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公开(公告)号：CN114134211A
公开(公告)日：2022-03-04
申请号：CN202111489506.X
申请日：2021-12-07
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/6851 , G01N33/573 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/55 , A61K45/00 , A61K31/713 , A61K31/7088 , A61K48/00 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及USP30基因作为靶点在抑制塞内卡谷病毒复制中的应用。(1)本发明发现抑制或沉默宿主USP30基因，能够抑制塞内卡谷病毒的复制，即USP30可作为靶点用于筛选抑制塞内卡谷病毒复制的药物；(2)本发明提供了干扰塞内卡谷病毒复制的小干扰RNA，能够抑制塞内卡谷病毒的复制；(3)本发明提供了一种特异性靶向USP30基因的sgRNA，结合CRISPR‑Cas9技术实现了USP30基因的完全敲除，获得的单克隆细胞系USP30‑KOs对SVA具有抗性表型，能够显著抑制SVA在细胞内的复制，为进一步研究USP30基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
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公开(公告)号：CN114134211B
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202111489506.X
申请日：2021-12-07
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/6851 , G01N33/573 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/55 , A61K45/00 , A61K31/713 , A61K31/7088 , A61K48/00 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及USP30基因作为靶点在抑制塞内卡谷病毒复制中的应用。(1)本发明发现抑制或沉默宿主USP30基因，能够抑制塞内卡谷病毒的复制，即USP30可作为靶点用于筛选抑制塞内卡谷病毒复制的药物；(2)本发明提供了干扰塞内卡谷病毒复制的小干扰RNA，能够抑制塞内卡谷病毒的复制；(3)本发明提供了一种特异性靶向USP30基因的sgRNA，结合CRISPR‑Cas9技术实现了USP30基因的完全敲除，获得的单克隆细胞系USP30‑KOs对SVA具有抗性表型，能够显著抑制SVA在细胞内的复制，为进一步研究USP30基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
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公开(公告)号：CN105567873B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201610054568.0
申请日：2016-01-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种快速检测羊痘病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测羊痘病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应，并均只能特异性检测绵羊痘病毒和山羊痘病毒。分别用本发明的两个试剂盒检测羊痘病毒疑似样品，结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR均具有很高的符合度。因此，本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测绵羊痘或山羊痘病毒，为绵羊痘或山羊痘病毒的鉴别诊断提供了有效技术手段。
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公开(公告)号：CN105567873A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610054568.0
申请日：2016-01-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种快速检测羊痘病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测羊痘病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应，并均只能特异性检测绵羊痘病毒和山羊痘病毒。分别用本发明的两个试剂盒检测羊痘病毒疑似样品，结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR均具有很高的符合度。因此，本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测绵羊痘或山羊痘病毒，为绵羊痘或山羊痘病毒的鉴别诊断提供了有效技术手段。
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公开(公告)号：CN113416768B
公开(公告)日：2022-05-17
申请号：CN202110761133.0
申请日：2021-07-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N5/10 , A61K48/00 , A61K31/713 , A61P31/14 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及一种PRKRA基因作为靶点在抑制小反刍兽疫病毒复制中的应用。本发明首先发现通过抑制或沉默宿主PRKRA基因，能够抑制小反刍兽疫病毒的复制，可作为靶点用于制备抑制小反刍兽疫病毒复制的药物；其次，以PRKRA基因为靶点，本发明设计了小干扰RNA，所述小干扰RNA能够干扰小反刍兽疫病毒复制，可用于制备抑制小反刍兽疫病毒的复制的药物；并且，本发明提供了一种特异性靶向PRKRA基因的sgRNA，所述的sgRNA能够特异性靶向PRKRA基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了PRKRA基因的完全敲除，获得的单克隆细胞系PRKRA‑KOs对PPRV具有抗性表型，能够显著抑制PPRV在细胞内的复制，为进一步研究PRKRA基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114058619A
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202111392731.1
申请日：2021-11-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/55 , C12N5/10 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及RIPLET敲除细胞系的构建及作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中RIPLET基因表达能促进小核糖核酸病毒科病毒，尤其是口蹄疫病毒和塞内卡病毒的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向RIPLET的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向RIPLET基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了RIPLET基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小核糖核酸病毒科病毒，尤其是口蹄疫病毒和塞内卡病毒的复制，提高小核糖核酸病毒科病毒疫苗的生产量和抗原表达量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN111849979B
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202010576529.3
申请日：2020-06-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA及RPSA基因敲除细胞系的构建方法。本发明设计了一种特异性靶向RPSA基因的sgRNA；所述的sgRNA能够特异性靶向RPSA基因，应用CRISPR‑Cas9技术实现了对宿主细胞中RPSA基因的完全敲除，敲除效率高；本发明还提供了一种通过CRISPR‑Cas9技术将所述sgRNA转染于宿主细胞，构建RPSA基因敲除细胞系的方法；敲除宿主细胞中RPSA基因不仅能够促进FMDV病毒的复制，可用于提高FMDV疫苗的生产量和抗原表达量；而且还意外的发现，敲除宿主细胞中RPSA基因能够显著抑制塞内卡谷病毒在细胞内的复制；为进一步研究RPSA基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
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公开(公告)号：CN113416768A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110761133.0
申请日：2021-07-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N5/10 , A61K48/00 , A61K31/713 , A61P31/14 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及一种PRKRA基因作为靶点在抑制小反刍兽疫病毒复制中的应用。本发明首先发现通过抑制或沉默宿主PRKRA基因，能够抑制小反刍兽疫病毒的复制，可作为靶点用于制备抑制小反刍兽疫病毒复制的药物；其次，以PRKRA基因为靶点，本发明设计了小干扰RNA，所述小干扰RNA能够干扰小反刍兽疫病毒复制，可用于制备抑制小反刍兽疫病毒的复制的药物；并且，本发明提供了一种特异性靶向PRKRA基因的sgRNA，所述的sgRNA能够特异性靶向PRKRA基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了PRKRA基因的完全敲除，获得的单克隆细胞系PRKRA‑KOs对PPRV具有抗性表型，能够显著抑制PPRV在细胞内的复制，为进一步研究PRKRA基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
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公开(公告)号：CN114058619B
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202111392731.1
申请日：2021-11-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/55 , C12N5/10 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及RIPLET敲除细胞系的构建及作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中RIPLET基因表达能促进小核糖核酸病毒科病毒，尤其是口蹄疫病毒和塞内卡病毒的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向RIPLET的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向RIPLET基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了RIPLET基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小核糖核酸病毒科病毒，尤其是口蹄疫病毒和塞内卡病毒的复制，提高小核糖核酸病毒科病毒疫苗的生产量和抗原表达量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN111744000B
公开(公告)日：2021-03-23
申请号：CN202010676834.X
申请日：2020-07-14
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于兽药生物制品技术领域，具体涉及一种免疫抑制功能降低的口蹄疫重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用。本发明首先发现了FMDV 3B蛋白具有免疫抑制功能，并发现了发挥免疫抑制功能的关键位点；其次通过在FMDV 3B蛋白的三个重复拷贝中分别引入关键位点氨基酸突变，构建了FMDV 3B蛋白免疫抑制功能丧失的口蹄疫重组疫苗株，所述口蹄疫重组疫苗株在干扰素通路缺陷的口蹄疫生产细胞系BHK‑21中稳定传代，且不影响病毒滴度，而其在猪源宿主细胞(PK‑15)中毒力下降，发挥了更强的天然免疫应答诱导能力；最后，将获得的重组疫苗株制备成灭活疫苗，能够促进早期免疫应答，诱导高水平抗体产生，提高了生物安全性及免疫保护效力，具备良好的应用前景。
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