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公开(公告)号：CN103695431A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201410001384.9
申请日：2012-06-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/867 , C12N15/10 , A61P31/14
Abstract: 一种用于抑制猪瘟病毒复制的NS5B303shRNA，所述包含siRNA序列，shRNA慢病毒表达载体构建，复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染PK-15细胞（猪肾细胞）以及抑制猪瘟病毒复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制猪瘟病毒在敏感细胞上复制的作用。本发明对猪瘟病毒体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向猪瘟病毒基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向猪瘟病毒的siRNA的转基因动物。为shRNA应用于猪瘟病毒的基因功能研究以及猪瘟的防治积累了必要的实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。
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公开(公告)号：CN103667297A
公开(公告)日：2014-03-26
申请号：CN201310752351.3
申请日：2012-06-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , A61P31/14 , C12N15/867 , C12N15/10
Abstract: 一种用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的1010shRNA，所述包含siRNA序列、shRNA慢病毒表达载体构建、复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染Marc-145细胞（绿猴肾细胞）以及抑制PRRSV复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制PRRSV在敏感细胞上复制的作用。本发明对PRRSV体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向PRRSV基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒的siRNA的转基因动物。为RNAi应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因功能研究以及猪繁殖与呼吸综合征的防治积累了实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。
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公开(公告)号：CN103436633A
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201310269949.7
申请日：2013-06-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测猪瘟病毒的TaqmanReal-timeRT-PCR试剂盒，包含OneStepRT-PCRbufferIII、ExTaqHS、PrimerScriptRTEnzymeMixII、阴性对照、阳性对照、以及序列SEQIDNO:1至SEQIDNO:2的扩增引物及SEQIDNO:3的探针引物的混合物。本发明将反转录和PCR扩增过程在一步反应中完成，使得检测时间缩短，有利于快速检测。本发明还使用了探针法，只有当探针引物特异的结合到扩增靶序列上时才会产生有效的结果，而且闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染，与普通PCR方法相比具有更高的准确性，有助于CSFV的防控和隐性带毒动物的剔除。
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公开(公告)号：CN102660546A
公开(公告)日：2012-09-12
申请号：CN201210180504.7
申请日：2012-06-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/867 , C12N15/10
Abstract: 一种用于抑制口蹄疫病毒复制的RNAi及其制备方法，所述包含siRNA序列、shRNA慢病毒表达载体构建、复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染PK-15细胞（猪肾细胞）以及抑制口蹄疫病毒复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制口蹄疫病毒在敏感细胞上复制的作用。本发明对口蹄疫病毒体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向口蹄疫病毒基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向口蹄疫病毒的siRNA的转基因动物。为RNAi应用于口蹄疫病毒的基因功能研究以及口蹄疫的防治积累了必要的实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。
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公开(公告)号：CN101418303A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810150304.0
申请日：2008-07-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/40 , C12N15/70 , C07K14/08 , A61K39/187 , A61P31/14
Abstract: 一种猪瘟重组亚单位疫苗的制备方法，包括下述步骤：A.利用逆转录－聚合酶链式反应方法克隆猪瘟疫苗株E2蛋白的编码基因；B.构建融合E2基因：C.构建重组表达载体rE2；D.rE2的诱导表达：E.rE2纯化。F.Western blotting方法检测rE2活性。本发明创造性地以双E2基因串联表达方式使E2抗原表位的数量增加一倍，显著提高了重组E2亚单位疫苗的免疫效果；为提高双E2蛋白表达效率，在第二个E2基因 5′端起始密码子(ATG)上游增加一个大肠杆菌RBS序列(5′－AAGGAG－3′)；同时在串联的E2基因之间增加氨基酸接头5′－GSA GSAAGS GEF－3′，使获得的E2蛋白能够完整展示其抗原表位。本发明的E2蛋白重组亚单位疫苗，免疫保护效果与猪瘟兔化弱毒疫苗相当。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1539989A
公开(公告)日：2004-10-27
申请号：CN200310103408.3
申请日：2003-10-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供一种生产猪瘟疫苗用抗原蛋白的方法，具体步骤包括：从猪瘟毒株提取病毒RNA，经反转录获得猪瘟病毒免疫基因E2；以E2基因为模板，进行聚合酶链反应，同时，根据毕赤酵母对密码子的偏爱性对E2基因进行密码子优化，然后通过酶切位点插入到毕赤酵母表达载体；将重组表达载体导入毕赤酵母菌，筛选出重组毕赤酵母菌；鉴定重组酵母菌的表达产物，并检测表达产物的免疫活性，确定入选的重组酵母菌；对选好的重组酵母菌的培养条件进行试验分析，选择出优化培养条件；在优化培养条件下培养重组酵母菌，生产疫苗用抗原蛋白。
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公开(公告)号：CN1539976A
公开(公告)日：2004-10-27
申请号：CN200310103414.9
申请日：2003-10-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明的目的在于建立一个适合我国猪瘟病毒情况的猪瘟病毒的基因操作技术平台。为了达到该目的，本发明的猪瘟病毒cDNA，是以猪瘟病毒RNA为模板，反转录合成的cDNA；该cDNA的5’端上游具有T7 RNA聚合酶启动子，3’末端具有单一的限制性酶切位点。构建猪瘟病毒感染性cDNA的方法步骤包括：根据猪瘟病毒RNA设计反转录用带有酶切位点的特异性引物；以所述RNA为模板，反转录合成cDNA；分段扩增所述cDNA各片段；将扩增后的cDNA各片段分别克隆入质粒载体；将所述cDNA各片段连接，构成带有基因组全长cDNA的质粒载体；纯化回收全长cDNA。
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公开(公告)号：CN114895027B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202210523485.7
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , C07K16/10 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑①免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑①通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑①免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑①蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN111808858B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202010663216.1
申请日：2020-07-10
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N5/10 , C12N7/00
Abstract: 本发明公开了两个siRNA序列及其靶标基因序列，通过siRNA对Vero‑E6培养细胞内si‑LNC_002015基因的两个靶点进行干扰，使得Vero‑E6培养细胞内PEDV RNA拷贝数和蛋白表达量与对照相比明显升高，毒价提升。
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公开(公告)号：CN114959113A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210524500.X
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C07K16/10
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑1免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑1通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑1免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑1蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。
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