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公开(公告)号：CN113151354B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202110300094.4
申请日：2021-03-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于在病毒或细胞基因组上条件性敲除目的基因的条件性敲除片段、质粒及条件性敲除目的基因的方法，所述条件性敲除片段包括目的基因左同源重组臂LA、筛选标记物基因表达元件、lac阻遏子基因表达元件、lac操纵子基因表达元件、目的基因右同源重组臂RA；同时构建了含有所述条件性敲除片段的质粒；并提供了一种运用上述质粒进行目的基因条件性敲除的方法。相对于现有技术，本发明仅通过一个条件敲除片段或含有条件敲除的质粒就实现了目的基因的条件性敲除，具有操作流程简单，敲除效率高，筛选过程便捷等优势。
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公开(公告)号：CN114107228A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111335696.X
申请日：2021-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 冯涛 , 李攀 , 刘华南 , 石正旺 , 马昭 , 申超超 , 齐晓兰 , 吴盼雪 , 张克山 , 李丹 , 党文 , 杨波 , 王琦 , 曹丽艳 , 朱紫祥 , 田宏 , 郭建宏 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种缺失十二个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV CN/GS 2018病毒中联合缺失G‑ACD‑00190、MGF 110‑9L、G‑ACD‑00210、MGF 360(9L、10L、11L、12L、13L、14L)、MGF 505(1R、2R、3R)基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株减毒非洲猪瘟疫苗株；所述减毒非洲猪瘟疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康、免疫后在猪血液内检测不到病毒的存在，且能够对ASFVCN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN113956353A
公开(公告)日：2022-01-21
申请号：CN202111182911.7
申请日：2021-10-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 中国农业科学院都市农业研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS‑CoV）N蛋白单克隆抗体。本发明将全长N蛋白基因克隆至pET32a载体中，构建出原核表达重组质粒pET32a‑N，通过诱导表达、蛋白纯化获得纯化的N蛋白。将纯化的N蛋白免疫Balb/c小鼠，随后取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合，筛选获得两个抗N蛋白的单克隆抗体，分别命名为4B10和6E8。通过截短表达，发现该抗体能特异性识别并结合N蛋白的N端区域，4B10和6E8识别区域是64～84aa。本发明提供的上述单克隆抗体，可利用基因工程或蛋白质工程方法获得。该抗体能特异性识别SADS‑CoV，对病毒还具有中和活性，为探究SADS‑CoV致病机制的研究、早期检测试剂盒和治疗性抗体的开发提供了新的原材料。
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公开(公告)号：CN112791084B
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN202110291059.0
申请日：2021-03-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K31/4155 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于非洲猪瘟治疗技术领域，具体涉及ML‑60218用于预防或治疗非洲猪瘟的新用途。本发明意外发现，ML‑60218能够显著抑制非洲猪瘟病毒蛋白p30的表达，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制ASFV的早期感染；并且ML‑60218能够显著抑制非洲猪瘟病毒的复制，降低非洲猪瘟病毒感染后的病毒滴度，可作为非洲猪瘟病毒的抑制剂，用于预防或治疗非洲猪瘟。
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公开(公告)号：CN112481220B
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN202011206761.4
申请日：2020-11-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/20 , C07K16/40 , C07K16/08 , C12P21/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及抗非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用小鼠腹腔培养和体外细胞培养杂交瘤细胞7D12制备单克隆抗体，效价测定检测结果表明，本发明杂交瘤细胞株7D12所分泌的单克隆抗体诱导小鼠产生的腹水抗体效价为107，杂交瘤细胞培养上清的效价达到1:1280。本发明制备的单克隆抗体为研究ASFV解旋酶功能及其分子机制积累了关键性的生物学材料，基于该单克隆抗体本身生物学特性建立的间接免疫荧光抗原检测方法为ASFV精准、快速诊断提供了支撑，本发明制备的单克隆抗体能显著抑制或者阻断ASFV复制为ASFV预防和治疗提供了可能的产品支持。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113355275A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110656125.X
申请日：2021-06-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种羔绵羊睾丸支持细胞、睾丸支持细胞亚克隆及其分离方法和应用，其中，所述支持细胞SCST的保藏编号为CCTCC No.C2019203，将其转染SV40大T抗原基因使其永生化，然后进行压力粗筛、压力分种以及持续传代，得到细胞亚克隆SCST‑T F13，其保藏编号为CCTCC No.C202130，可用于牛结节性皮肤病、羊痘及羊口疮等病毒的分离及规模化繁殖。所述细胞亚克隆可以用含国产血清的培养基培养，降低了生产成本，适合规模化生产应用。本发明的细胞亚克隆与常规原代细胞相比，而且能够明显提高牛结节性皮肤病毒的分离率，且牛结节性皮肤病毒的致病变时间明显缩短、分离病毒的拷贝数比传统细胞提高100倍以上，可以为牛结节性皮肤病毒的规模化繁殖及病毒感染致病机制研究提供工具。
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公开(公告)号：CN113248574A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110515657.1
申请日：2021-05-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/085 , C12N15/70 , C12N15/62 , C07K1/22 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种高效表达A型塞内卡病毒结构蛋白的方法。本发明首先对编码A型塞内卡病毒三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的基因进行原核表达密码子优化，并借助小泛素样融合蛋白，获得了在大肠杆菌中同时可溶性表达三种结构蛋白的单个质粒；其次，在大肠杆菌中转入分子伴侣质粒和上述A型塞内卡病毒结构蛋白质粒，进一步提高了A型塞内卡病毒结构蛋白的可溶性表达，并解决了目标蛋白表达量不均一的问题，获得的目标蛋白约占菌体总蛋白25％以上；由表达获得的三种结构蛋白配制获得的塞内卡病毒病亚单位疫苗，能够激发猪体产生较高水平的中和性抗体，对国内A型塞内卡流行毒具有良好的保护作用。
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公开(公告)号：CN113151310A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110176679.X
申请日：2021-02-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种可用作疫苗的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株及其构建方法，该病毒株是亲本非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株的基因缺失弱毒株。本发明发现了DP71L基因是对猪致病性致弱的新靶标基因，并发现联合丧失MGF360‑18R基因、DP71L基因和DP96R基因编码蛋白的功能，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株高剂量(104HAD50)免疫猪后，对猪完全致弱，免疫猪健康，不发病，与免疫猪同居猪核酸也呈阴性，不水平传播，具有较好安全性；且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株的攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN112592401B
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN202011452599.4
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN111996201B
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202010212907.X
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 曹伟军 , 蒋保余 , 朱紫祥 , 魏婷 , 郑敏 , 田宏 , 张克山 , 张伟 , 刘永杰 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组A型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供了塞内卡病毒重组核酸、包含所述重组核酸的塞内卡重组病毒、包含所述塞内卡重组病毒的塞内卡重组疫苗株及其制备方法和应用。本发明对SVV/FJ/001株基因缺失突变改造，在其cDNA中融合进A型FMDV的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的基因，且表达产物具有良好的反应原性；获得的疫苗株抗原产能高，致病性显著降低甚至对猪无致病性，灭活疫苗免疫动物后不仅能激发SVA的免疫应答，而且能产生针对融合基因的免疫活性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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