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公开(公告)号：CN116262910A
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202111517914.1
申请日：2021-12-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 西北农林科技大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒重组毒株、构建方法及应用。本发明将现有流行的猪流行性腹泻病毒PEDV CH/SX/2016株的S基因序列替换为SEQ ID NO.1所示的S2015基因序列后构建获得了一种PEDV CH/SX/2016株感染性克隆，将含有SEQ ID NO.4所示的感染性cDNA的质粒转染细胞，成功拯救获得了一株猪流行性腹泻病毒重组毒株rCH/SX/2016‑S2015；解决了原毒株无法利用反向遗传学工程被成功拯救的问题，获得的重组病毒株rCH/SX/2016‑S2015具有与原毒株相当的活性，可用于制备PEDV诊断试剂和/或疫苗。
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公开(公告)号：CN114316035B
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202210010319.7
申请日：2022-01-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨洋 , 秦晓东 , 茹毅 , 张伟 , 杨帆 , 曹伟军 , 朱紫祥 , 卢炳州 , 赵东梅 , 任蕊芳 , 吴秀萍 , 郝荣增 , 刘华南 , 李亚军 , 吴国华 , 李丹 , 田宏 , 张克山 , 毛箬青
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种通用型的口蹄疫病毒结构蛋白抗体、制备方法及应用。本发明以O型口蹄疫病毒146s为免疫原，免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，筛选获得两株高效分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞系，并获得了两种鼠单克隆抗体m33和m77。免疫印迹和间接免疫荧光试验表明所述单克隆抗体m33和m77对O型不同谱系病毒和A型谱系不同病毒均具有广谱反应性。m33和m77抗体特异性结合在FMDV结构蛋白中的型间保守抗原表位，相较于现有抗体，显著提高了检测结果的灵敏度和特异性，适用于O型和A型FMDV感染或灭活疫苗免疫后结构蛋白抗体的检测，是一种FMD非免疫动物群体感染状况监测的新方法。
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公开(公告)号：CN116143887A
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202211096917.7
申请日：2022-09-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/01 , C07K16/08 , C12N15/34 , C12N15/70 , C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及非洲猪瘟p72蛋白的抗原表位肽、针对该抗原表位肽的单抗克隆抗体及其应用。本发明通过将非洲猪瘟病毒p72基因克隆至原核表达载体pET‑30a中，构建出原核表达载体pET‑30a‑p72，表达并纯化得到p72重组蛋白。将p72重组蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合获得杂交瘤细胞，应用间接ELISA方法筛选获得抗p72重组蛋白的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的p72蛋白的抗原表位肽为非洲猪瘟病毒p72蛋白20～39肽段，其氨基酸序列为20ILAQDLLNSRISNIKNVNKS39。
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公开(公告)号：CN112159814B
公开(公告)日：2023-05-16
申请号：CN202011187615.1
申请日：2020-10-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/117 , A61K39/39 , A61K39/135 , A61P31/14 , A61P37/04
Abstract: 本发明公开了一种含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂的制备及其用途。本发明提供了序列为SEQ ID No.1的CpG寡聚脱氧核苷酸，且所有核苷酸均为硫代修饰。本发明的CpG寡聚脱氧核苷酸具有增强B细胞增殖和ThΙ型免疫反应的能力；硫代修饰延长了其在体内的滞留时间，降低了各种水解酶对其的水解作用；制备方法简单，质量易于控制，易于规模化生产；安全性好，毒副作用低。本发明提供了含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂的制备方法，CpG寡聚脱氧核苷酸与油乳剂ISA 206按一定比例混合、乳化而成，工艺简单，性能稳定。本发明提供的含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂，可促进抗体的提前产生并具有强烈的免疫增强作用。
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公开(公告)号：CN115850394A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202310036130.X
申请日：2023-01-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K14/085 , C07K19/00 , G01N33/569 , G01N33/68 , A61K39/125 , A61K39/385 , A61P31/14 , C07K16/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种塞内卡病毒VP2结构蛋白的B细胞表位及应用。本发明使用Pepscan和生物信息学预测方法鉴定获得了SVA株CH/FJ/2017中VP2蛋白的一个B细胞表位肽(IDE)；所述B细胞表位肽具有良好的免疫原性，可以作为抗原能够检测塞内卡病毒抗体或抗塞内卡病毒VP2蛋白的抗体，而且所述B细胞表位肽不与其他表位交叉反应，具有良好的特异性；所述的线性B细胞表位(IDE)肽在SVA流行毒株中完全保守；而且所述的B细胞表位肽具有一定的中和活性，可以在一定程度上有效阻断SVA感染。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114410587A
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202210029737.0
申请日：2022-01-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/10 , C12N15/34 , C12N15/867 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及非洲猪瘟病毒技术领域，具体涉及一种提高非洲猪瘟病毒非靶细胞MA‑104细胞系感染滴度的方法。将非洲猪瘟病毒的D1133L基因片段插入慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将重组慢病毒转染MA104细胞系，得到稳定表达D1133L基因的MA‑104细胞系MA‑104/D1133L，利用该细胞系接种非洲猪瘟病毒，可大大提高非洲猪瘟病毒滴度。感染ASFV后的MA‑104/D1133L可以多次收毒。本发明得到的MA‑104/D1133L细胞株与野生型MA‑104相比，ASFV病毒滴度显著提高。
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公开(公告)号：CN114316037A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202210011223.2
申请日：2022-01-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨洋 , 秦晓东 , 茹毅 , 张伟 , 杨帆 , 曹伟军 , 朱紫祥 , 卢炳州 , 赵东梅 , 任蕊芳 , 吴秀萍 , 郝荣增 , 刘华南 , 李亚军 , 吴国华 , 李丹 , 田宏 , 张克山 , 毛箬青
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N5/20 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/58
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体、制备方法及应用。本发明以O型口蹄疫病毒146s作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，获得一株高效分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并获得了一种鼠单克隆抗体m19。间接免疫荧光试验表明所述单克隆抗体m19对O型不同谱系毒株均具有很好的反应性，而不和A型不同谱系毒株反应。利用单克隆抗体m19和O型结构蛋白兔抗血清建立了O型口蹄疫病毒结构蛋白固相竞争ELISA检测试剂盒，相较于现有抗体，显著提高了检测结果的灵敏度和特异性，适用于O型口蹄疫感染或灭活疫苗免疫后结构蛋白抗体的检测，同时，也是一种监测口蹄疫非免疫地区感染情况的新方法。
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公开(公告)号：CN111849979B
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202010576529.3
申请日：2020-06-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA及RPSA基因敲除细胞系的构建方法。本发明设计了一种特异性靶向RPSA基因的sgRNA；所述的sgRNA能够特异性靶向RPSA基因，应用CRISPR‑Cas9技术实现了对宿主细胞中RPSA基因的完全敲除，敲除效率高；本发明还提供了一种通过CRISPR‑Cas9技术将所述sgRNA转染于宿主细胞，构建RPSA基因敲除细胞系的方法；敲除宿主细胞中RPSA基因不仅能够促进FMDV病毒的复制，可用于提高FMDV疫苗的生产量和抗原表达量；而且还意外的发现，敲除宿主细胞中RPSA基因能够显著抑制塞内卡谷病毒在细胞内的复制；为进一步研究RPSA基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
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公开(公告)号：CN112076314B
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
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公开(公告)号：CN113509489A
公开(公告)日：2021-10-19
申请号：CN202110442796.6
申请日：2021-04-23
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K33/04 , A61P31/20 , A61K31/195
Abstract: 本发明属于非洲猪瘟治疗技术领域，具体涉及亚硒酸钠(Na2SeO3)或含有亚硒酸钠的组合物用于预防或治疗非洲猪瘟的新用途。本发明首先发现，亚硒酸钠能够抑制非洲猪瘟病毒蛋白p72的表达，抑制非洲猪瘟病毒基因拷贝数和病毒滴度，能够抑制ASFV的复制和感染，用于预防或治疗非洲猪瘟；同时，本发明发现，亚硒酸钠和EGTA的组合物能够显著抑制非洲猪瘟病毒蛋白p72的表达，抑制ASFV的复制和感染；并且所述组合物对ASFV的抑制效果显著优于单独使用亚硒酸钠和EGTA，可用于预防或治疗非洲猪瘟。
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