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公开(公告)号：CN101463395A
公开(公告)日：2009-06-24
申请号：CN200810241706.1
申请日：2008-12-26
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种用于检测猪繁殖与呼吸综合症病毒的试剂盒和检测方法，所述试剂盒包含RNA酶抑制剂、AMV逆转录酶、Taq酶、无RNA酶水、One Step RNA PCR混合液、阴性对照以及序列SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6引物的混合物，所述检测包括使用所述试剂盒进行RT－PCR扩增的步骤。所述方法能快速、敏感、准确以及低成本地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒。
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公开(公告)号：CN101418304A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810150305.5
申请日：2008-07-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性E2抗原的方法，包括下述步骤：A.克隆E2基因抗原结构域部分；B.构建重组表达载体；C.在LB培养基中表达，获得可溶性的重组E2蛋白；D.亲和层析纯化重组E2蛋白；E.pGST－E2表达蛋白的鉴定，SDS－PAGE和Western Blotting鉴定表达的重组E2蛋白；F.利用重组E2蛋白建立检测猪瘟血清抗体间接ELISA方法。本发明改良了传统的LB培养基，促进可溶性的E2蛋白表达；解决了猪瘟病毒E2抗原在大肠杆菌中主要以包涵体表达的难题，获得的可溶性E2蛋白与完整猪瘟病毒粒子具有相似的免疫学效果，可作为替代猪瘟病毒粒子的抗原，建立敏感性、特异、安全和可靠的猪瘟病毒血清抗体的检测间接ELISA方法。
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公开(公告)号：CN1232648C
公开(公告)日：2005-12-21
申请号：CN200310103408.3
申请日：2003-10-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供一种生产猪瘟疫苗用抗原蛋白的方法，具体步骤包括：从猪瘟毒株提取病毒RNA，经反转录获得猪瘟病毒免疫基因E2；以E2基因为模板，进行聚合酶链反应，同时，根据毕赤酵母对密码子的偏爱性对E2基因进行密码子优化，然后通过酶切位点插入到毕赤酵母表达载体；将重组表达载体导入毕赤酵母菌，筛选出重组毕赤酵母菌；鉴定重组酵母菌的表达产物，并检测表达产物的免疫活性，确定入选的重组酵母菌；对选好的重组酵母菌的培养条件进行试验分析，选择出优化培养条件；在优化培养条件下培养重组酵母菌，生产疫苗用抗原蛋白。
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公开(公告)号：CN114924069B
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202210524481.0
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , C12Q1/6804 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑2免疫磁珠的直扩检测山羊痘病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的山羊痘病毒单域抗体9‑4‑2通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑2免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑2蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集山羊痘病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了山羊痘病毒由于形成夹皮时间久，不容易在病毒复制高峰期发现，采集病料病毒含量低微，所以检出率低，容易漏检等现象；以及提取基因组DNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，而且高效、灵敏、特异、稳定、实用，本发明的提出为山羊痘病毒病的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN116004664A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202211638352.0
申请日：2022-12-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/31 , G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/532
Abstract: 本发明涉及布鲁氏菌检测技术领域。本发明提供了一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用，所述所述布鲁氏菌特异性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的布鲁氏菌特异性抗原特异性强，使用效果好。利用本发明的抗原制备的试纸条在阳性血清浓度稀释至1:40仍可检测到明显的阳性反应；用本发明的试纸条检测小肠耶尔森菌阳性血清和大肠杆菌阳性血清结果均为阴性，说明该试纸条有良好的特异性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113215084B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202110656119.4
申请日：2021-06-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种羊胎儿皮肤成纤维细胞、其分离方法与应用，其中，所述成纤维细胞的保藏号为CCTCC No：C2019202。本发明在羊胎儿皮肤成纤维细胞SFSFS的分离过程中分别采用含0.05%胰蛋白酶和0.02%EDTA的消化液以及Ⅳ型胶原酶处理羊胎儿皮肤组织，然后用含0.01‑0.05%胰蛋白酶‑EDTA消化液处理细胞；并采用3%胎牛血清+10‑40ng/ml的h‑EGF替代10%的胎牛血清培养羊胎儿皮肤成纤维细胞，使胎牛血清使用量大大减少，降低了SFSFS培养成本和羊口疮病毒生产成本，节约了资源。本发明的细胞株能够明显提高羊口疮病毒的分离率、缩短分离时间，且分离的羊口疮病毒毒价和病毒拷贝数也更高，可以为羊口疮病毒的规模化繁殖及病毒感染致病机制研究提供工具。
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公开(公告)号：CN114895027A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210523485.7
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , C07K16/10 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑①免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑①通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑①免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑①蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN108486069B
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN201810570334.0
申请日：2018-06-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)低含量样品的病毒分离方法，还公开了用于猪流行性腹泻病毒富集和分离的免疫纳米磁珠，该免疫纳米磁珠具有磁性的Fe2O3核心和偶联有PEDV膜蛋白特异性单域抗体的表面。传统方法从多重感染和低PEDV含量样品中分离病毒，需要病毒纯化和长时间盲传，分离效率低，限制了PEDV的研究工作。本发明利用纳米磁珠和PEDV特异性单域抗体制备了免疫纳米磁珠，能够有效捕获和富集粪便、组织等多种样品中的PEDV。样品经处理后利用免疫纳米磁珠进行病毒捕获和富集，将结合病毒的免疫纳米磁珠直接接种到Vero细胞，即可实现对病毒分离。本发明制备的免疫纳米磁珠和PEDV分离方法，适用于临床复杂和低病毒含量样品中PEDV的快速、有效分离。
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公开(公告)号：CN110684824B
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN201911093383.0
申请日：2019-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/6804 , C12Q1/689 , C12Q1/04
Abstract: 本发明涉及一种用于检测布鲁氏菌抗原的免疫磁珠试剂盒，属于生物技术领域。所述试剂盒包括：免疫磁珠、qPCR反应混合液、检测布鲁氏菌的上游引物、下游引物和探针；所述免疫磁珠为鼠抗布鲁氏菌M5抗原单克隆IgG抗体与磁珠的偶联物。本发明所述试剂盒灵敏度高、稳定性好，快速有效，与传统分离方法相比，克服了布鲁氏菌病料检出率低以及直扩抗原检测过程中布鲁氏菌病原易降解，且病原DNA提取过程中使用的待检液体体积有限导致所提取的DNA无法达到qPCR检测的最低要求。
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公开(公告)号：CN108676792B
公开(公告)日：2020-12-25
申请号：CN201810501728.0
申请日：2018-05-23
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种基于驼源抗PPRV cDNA文库及其制备方法和应用，属于生物技术领域。其利用PPRV弱毒苗及浓缩、纯化弱毒苗制备抗原免疫骆驼，获得高质量免疫血清及全血；利用两端分别带有SfiIA、SfiIB酶切位点引物逆转录外周血淋巴细胞提取的总mRNA，合成全长cDNA第一链，PCR扩增，SfiI单酶切后定向插入特定载体pGADT7‑SfiI，获得基于驼源抗小反刍兽疫病毒抗体cDNA文库。经鉴定：文库库容>约2.0×106cfu/mL，插入片段约400bp～2kbp，平均长度约1Kbp，多样性好，重组率约100%；功能性分析表明：所构建的cDNA文库中存在具有中和活性抗小反刍兽疫病毒VHH抗体。本发明的提出为筛选抗小反刍兽疫病毒VHH抗体提供了平台，为小反刍兽疫的早期治疗和诊断提供了新的技术手段。
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