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公开(公告)号：CN116355905A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310323610.4
申请日：2023-03-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 兰州大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C07K14/47 , C12N7/00 , A61K39/135 , A61P31/14 , C12R1/93 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种促进小RNA病毒科病毒复制的BHK‑21细胞系、构建方法及应用。本发明提供了一种特异性靶向KLHL34的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向KLHL34基因，结合CRISPR‑Cas9技术在BHK‑21细胞系中实现了KLHL34基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV疫苗的生产量和抗原产量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗尤其是FMDV疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116004664A
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202211638352.0
申请日：2022-12-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/31 , G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/532
Abstract: 本发明涉及布鲁氏菌检测技术领域。本发明提供了一种布鲁氏菌特异性抗原及其应用，所述所述布鲁氏菌特异性抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的布鲁氏菌特异性抗原特异性强，使用效果好。利用本发明的抗原制备的试纸条在阳性血清浓度稀释至1:40仍可检测到明显的阳性反应；用本发明的试纸条检测小肠耶尔森菌阳性血清和大肠杆菌阳性血清结果均为阴性，说明该试纸条有良好的特异性。
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公开(公告)号：CN115028744A
公开(公告)日：2022-09-09
申请号：CN202210771918.0
申请日：2022-06-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C12N15/70 , A61K39/135 , A61P31/14 , G01N33/569 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明所述VP1嵌合纳米颗粒，为将O型/A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1和天然蛋白质纳米骨架蛋白共价连接得到。本发明在制备所述VP1嵌合纳米颗粒时，通过蛋白骨架共价连接口蹄疫VP1结构蛋白，将其展示在纳米笼外部，并且采用小泛素样修饰蛋白原核表达系统，既促进了目的蛋白的正确折叠，提高可溶性表达，又兼顾了原核表达系统表达效率高，成本低等优点。本发明的O型/A型口蹄疫病毒VP1嵌合纳米颗粒可在制备用于预防O型/A型口蹄疫病毒引起疾病的疫苗中应用，也可在制备用于检测O型/A型口蹄疫病毒的检测试剂中应用。
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公开(公告)号：CN114895027A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210523485.7
申请日：2022-05-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/543 , C07K16/10 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑①免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑①通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑①免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑①蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。
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公开(公告)号：CN112076314B
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113564276A
公开(公告)日：2021-10-29
申请号：CN202110550305.X
申请日：2021-05-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了FMDV可视化RT‑LAMP检测方法的建立。以合成的39条3D‑T7序列的体外RNA转录本为模板，对RT‑LAMP引物、引物浓度、反应时间、反应温度和显色剂等进行了筛选。建立了FMDV的RT‑LAMP检测方法，总体系为20μL，包括RT‑LAMP缓冲液15.2μL，BstAMV酶混合液1.5μL，外引物F3和B3各0.04μL(100μM)，内引物FIP和BIP各0.5μL(100μM)，环引物Floop和Bloop各0.11μL(100μM)，中性红1μL(500μM)，模板1μL。反应时间55min，反应温度65℃。反应结束后，若反应管溶液变为粉红色判为阳性，若为橘黄色则判为阴性。该方法特异性强，不与BVDV、ORFV、SPPV/GTPV、SVDV、BTV、PRRSV、CSFV、PRV、PPV和PCV等病毒发生反应。建立的FMDV可视化RT‑LAMP方法为基层现场检测奠定了基础，以达到快速诊断FMDV的目的。
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公开(公告)号：CN106916832B
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN201710256371.X
申请日：2017-04-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/42 , C12N7/00 , C12N15/85 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及一种分离的口蹄疫病毒核酸及其在制备口蹄疫病毒重组核酸和/或口蹄疫重组疫苗株中的用途、一种口蹄疫病毒重组核酸、包含所述重组核酸的口蹄疫重组病毒、由所述重组核酸编码的口蹄疫重组病毒、包含所述口蹄疫重组病毒的口蹄疫重组疫苗株、一种制备所述口蹄疫重组病毒的方法、由所述方法制备得到的口蹄疫重组疫苗以及所述口蹄疫重组疫苗在制备用于预防和/或控制动物口蹄疫疾病的药物中的用途。
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公开(公告)号：CN111996202A
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN202010212908.4
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 朱紫祥 , 魏婷 , 曹伟军 , 刘华南 , 郑敏 , 张伟 , 田宏 , 张克山 , 刘永杰 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/295 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组O型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明通过对SVV/FJ/001株进行基因缺失突变改造，同时在SVA cDNA中融合进O型口蹄疫病毒的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的外源FMDV VP1基因，且表达产物具有良好的反应原性；制备得到的疫苗株抗原产能高，致病性显著降低甚至对猪无致病性，灭活疫苗免疫动物后不仅能激发SVA的免疫应答，而且能产生针对融合基因的免疫活性，该疫苗株显著提高了生物安全性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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公开(公告)号：CN111773383A
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN202010630218.0
申请日：2020-07-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 田宏 , 张克山 , 曹伟军 , 马旭升 , 党文 , 靳野
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种具有交叉保护作用的O型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明首先通过血清交叉中和试验，筛选中意外地发现对我国O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉中和作用的毒株；以该毒株三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％-35％，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。由这三种口蹄疫病毒结构蛋白配制的口蹄疫疫苗，最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份，且对我国多株O型口蹄疫流行毒具有广泛交叉保护作用。
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公开(公告)号：CN111394389A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010212435.8
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/86 , C12N15/66 , C12N7/01 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种针对正链RNA病毒的单质粒拯救系统及基于该系统的塞内卡病毒感染性克隆及构建方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供了针对正链RNA病毒的单质粒拯救系统以及利用该拯救系统可定向设计SVA反向重组疫苗及构建SVA定向突变毒株在病毒基因功能、病毒变异及致病机制等研究中的应用。本发明利用聚合酶I和聚合酶II启动子、终止子、核酶等元件构建的单质粒塞内卡病毒拯救系统，实现了在质粒水平上编辑病毒基因组，为病毒定向设计、构建和拯救提供了技术平台。
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