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公开(公告)号：CN118620935A
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410596707.7
申请日：2024-05-14
申请人： 江西富祥药业股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明涉及一种短柄镰刀菌CRISPR‑Cas9基因编辑的系统及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提出了一个针对短柄镰刀菌的基因编辑系统，包括重组递送质粒和目标基因片段，以pUC19质粒和pFC332质粒为骨架，共表达铜绿假单胞菌噬菌体单链DNA退火蛋白PapRecT和铜绿假单胞菌单链DNA结合蛋白PaSSB，构建得到重组递送质粒pUC19‑Fb5srRNA‑sg RNA‑PapRecT‑PaSSB，并筛选得到用于筛选转化子PDA培养基以及用于制备短柄镰刀菌原生质体的复合酶体系。使用该系统和方法对短柄镰刀菌进行基因编辑，极大提升了基因编辑的正确率和稳定性，为短柄镰刀菌这一具有安全性的菌株作为底盘生物进行发酵奠定了基础，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN118516346A
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202410596002.5
申请日：2024-05-14
申请人： 江西富祥药业股份有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种高通量筛选高产菌体蛋白的短柄镰刀菌菌株的方法和应用，属于生物工程技术领域。本发明通过结合液滴微流控和流式细胞仪，通过关联蛋白质与RNA的关系，以SYTO RNA select染料再注射的方式实现了对短柄镰刀菌高产菌体蛋白菌株的筛选，并获得了一系列菌体蛋白产量提升的突变菌，如产量提升9.52％的短柄镰刀菌FXFB‑1。由于丝状真菌不能直接用流式细胞仪进行荧光检测，故本发明不但可以筛选高产菌体蛋白菌株，也适用于高通量筛选丝状真菌高产分泌蛋白菌株等。本发明提供的方法为短柄镰刀菌的高通量筛选及高产菌体蛋白的丝状真菌的高通量筛选奠定了基础，具有广阔的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN117660448B
公开(公告)日：2024-10-18
申请号：CN202311484595.8
申请日：2023-11-09
申请人： 江苏集萃未来食品技术研究所有限公司 , 江南大学
摘要： 本发明公开了一种产L‑色氨酸菌株的高通量筛选方法。本发明通过将产L‑色氨酸菌株的发酵液和M9培养基去培养一个指示菌株(指示菌株为含有表达质粒pSC101‑Ptac5‑7‑sfgfp的Escherichia coli BL21(DE3):ΔtrpR)，载体pSC101‑Ptac5‑7‑sfgfp上包含阻遏蛋白TrpR；该阻遏蛋白和两分子的L‑色氨酸结合，然后与杂合启动子Ptac5‑7上的trpO8序列结合，从而抑制下游基因的表达；绿色荧光基因sfgfp，用来产生荧光；以及杂合启动子Ptac5‑7用来表达sfgfp基因。本发明还设计并构建了一种响应L‑色氨酸的杂合启动子Ptac5‑7，在0～5g/L的L‑色氨酸浓度范围内，随着L‑色氨酸浓度的增加，该杂合启动子Ptac5‑7的表达强度逐渐减弱。
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公开(公告)号：CN117778442B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202311834611.1
申请日：2023-12-28
申请人： 江南大学
IPC分类号： C12N15/81 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N1/19 , C12R1/865
摘要： 本发明公开了一种可同时实现CRISPR激活和CRISPR干扰的表达系统及其应用，其中，表达系统包括第一表达框、第二表达框以及第三表达框，第一表达框中含有在非转录因子结合区域插入NCS序列的第一启动子，用于基因表达的激活，第二表达框中含有第二启动子以及位于基因起始密码子之后的NCS序列，用于基因表达的抑制，第三表达框中设置有dCas蛋白突变体以及用于靶向NCS序列的sgRNA。该系统可以同时靶向工程化的启动子，从而产生激活和抑制的效果，利用2个sgRNA同时产生对4个或者更多个基因的调控。
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公开(公告)号：CN116286422B
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202310428401.6
申请日：2023-04-20
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种合成抗紫外线化合物gadusol的重组毕赤酵母及其制备方法与应用。本发明构建了合成gadusol的工程化毕赤酵母表达系统，通过优化gadusol合成途径，提高关键酶表达水平、强化前体供应水平，使gadusol得到较为理想的产量。有效的提升了gadusol的微生物细胞合成产量。本发明的重组毕赤酵母用于后续的高密度发酵，能够进一步提高gadusol的合成产量。本发明的重组毕赤酵母能够高效生产gadusol，为后续gadusol的抗紫外辐射能力、抗氧化能力研究提供了很好的基础。
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公开(公告)号：CN118421586A
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202410614080.3
申请日：2024-05-17
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种合成不同分子量透明质酸的透明质酸合酶突变体，属于生物酶工程技术领域。本发明的透明质酸合酶突变体是对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的透明质酸合酶进行点突变或者复合突变，在此基础上筛选出的透明质酸合酶突变体能够合成不同分子量的透明质酸。本发明突变后的透明质酸合酶与突变前的透明质酸合酶相比，能够合成不同分子量的透明质酸，且所获得的透明质酸分子量范围在300KDa‑40000KDa，同时透明质酸的产量增加，具有很高的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN118345056A
公开(公告)日：2024-07-16
申请号：CN202410280548.X
申请日：2024-03-12
申请人： 江苏集萃未来食品技术研究所有限公司 , 江南大学
IPC分类号： C12N9/00 , C12N9/74 , C12N15/62 , C12N15/11 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/24 , C12P19/26 , C12R1/125
摘要： 本发明公开了一种空间分离的正交翻译系统及其应用。本发明为了增强微生物宿主内靶基因的特异性翻译表达，减少背景基因的错误翻译，提供了一种空间分离的正交翻译系统。具体地，首先将靶基因的密码子替换成TAG终止密码子，其次选取RTBA与凝血酶F2作为mRNA‑蛋白互作系统，之后异源表达TyrRS/tRNA，该系统可以将O‑甲基‑L‑酪氨酸掺入到琥珀终止密码子UAG中，并进一步将TyrRS与F2分别与无序蛋白融合表达，最终实现靶基因的翻译选择性提高至4.01倍。最后，对N‑乙酰葡糖胺差相异构酶AGE进行改造获得突变体AGEOMeY，其专一性常数kcat/Km相比于野生型提升了86.0％，并进一步在枯草芽孢杆菌胞内利用最优的正交翻译系统实现了AGEOMeY的特异性翻译表达，目标产物产量高达2.1g/L。
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公开(公告)号：CN118291462A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410360601.7
申请日：2024-03-27
IPC分类号： C12N15/113 , C07K14/77 , C12N15/72 , C12N1/21 , C12R1/19
摘要： 本发明涉及一种产卵清蛋白的重组大肠杆菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle 1917为出发菌株，敲除其内源质粒pMUT1，在其内源质粒pMUT2中引入中拷贝复制子p15A、乳糖操纵子和外源卵清蛋白编码基因，使用sigma因子结合位点sigma24串联PP5和Ptac启动子用于增强卵清蛋白的表达，并替换了原启动子的RBS序列，经过上述构建方法得到了一株可在无抗生素条件下生产卵清蛋白的重组大肠杆菌，结合指数补料和DO‑stat正向反馈补料策略，使卵清蛋白产量达到3.7g/L，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118222473A
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202410458064.X
申请日：2024-04-17
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种产5’‑肌苷酸的大肠杆菌及其构建方法与应用，属于生物工程技术领域。本发明提供的产5’‑肌苷酸的大肠杆菌的构建借助CRISPR/Cas9的方法，过程包括强化前体PRPP的供应，解除磷酸核糖焦磷酸激酶受到的反馈抑制，解除谷氨酸胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶受到的反馈抑制，解除阻遏蛋白的转录抑制，下调竞争途径通量，强化前体PRPP的供应和应用，构建出的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物，发酵培养48h后5’‑肌苷酸的产量达到780.66mg/L，与出发菌株相比产量提升，具有良好的工业化生产前景，实现了以葡萄糖为底物的5’‑肌苷酸稳定生产。
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公开(公告)号：CN118207147A
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202410458792.0
申请日：2024-04-17
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种高效生产5’‑肌苷酸的大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。为了减少大肠杆菌中5’‑肌苷酸的降解，通过CRISPR/Cas9系统进行了四个磷酸酶编码基因的敲除验证，并发现分别敲除UMP磷酸酶编码基因nagD和5’‑核苷酸酶编码基因ushA能够提升5’‑肌苷酸产量，之后为了抑制5’‑肌苷酸进一步转化成鸟苷酸和腺苷酸，单独敲除5’‑肌苷酸脱氢酶编码基因guaB，最终为了强化嘌呤合成过程中所需的甲酰基四氢叶酸的供给和利用，替换丝氨酸羟甲基转移酶编码基因glyA的启动子为Ptac，得到的重组大肠杆菌48h发酵5’‑肌苷酸产量达到2113.12mg/L，且发酵过程不需要添加抗生素，具有广阔的应用前景。
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