一种凝血酶原复合物的纯化方法

    公开(公告)号:CN118956835A

    公开(公告)日:2024-11-15

    申请号:CN202411449626.0

    申请日:2024-10-17

    摘要: 本发明提供一种凝血酶原复合物的纯化方法,包括以下步骤:原料过滤—S/D灭活并稀释—凝胶预处理—利用预处理后的DEAE A‑50装柱进行固定床柱层析—超滤浓缩—配液过滤、分装,冻干,得凝血酶原复合物纯化成品。本发明利用过滤罐,对混浆后的原料进行过滤,避免滤网在过滤过程中脱落和产生破裂,提高原料的处理效率,同时利用醋酸铵水溶液对溶胀A‑50凝胶进行预处理,提高溶胶对酸性蛋白的吸附量和吸附强度,在保证产物纯度的同时,可适当提高吸附和洗涤速度,以提高产量。

    一种空间分离的正交翻译系统及其应用

    公开(公告)号:CN118345056A

    公开(公告)日:2024-07-16

    申请号:CN202410280548.X

    申请日:2024-03-12

    摘要: 本发明公开了一种空间分离的正交翻译系统及其应用。本发明为了增强微生物宿主内靶基因的特异性翻译表达,减少背景基因的错误翻译,提供了一种空间分离的正交翻译系统。具体地,首先将靶基因的密码子替换成TAG终止密码子,其次选取RTBA与凝血酶F2作为mRNA‑蛋白互作系统,之后异源表达TyrRS/tRNA,该系统可以将O‑甲基‑L‑酪氨酸掺入到琥珀终止密码子UAG中,并进一步将TyrRS与F2分别与无序蛋白融合表达,最终实现靶基因的翻译选择性提高至4.01倍。最后,对N‑乙酰葡糖胺差相异构酶AGE进行改造获得突变体AGEOMeY,其专一性常数kcat/Km相比于野生型提升了86.0%,并进一步在枯草芽孢杆菌胞内利用最优的正交翻译系统实现了AGEOMeY的特异性翻译表达,目标产物产量高达2.1g/L。

    一种凝血酶的制备方法
    6.
    发明授权

    公开(公告)号:CN112011527B

    公开(公告)日:2023-07-07

    申请号:CN202010860939.0

    申请日:2020-08-25

    摘要: 本发明提供一种凝血酶的制备方法,其包括向包含凝血酶原的溶液中加入凝血酶原激活剂以激活凝血酶原,得到包含凝血酶的溶液,所述凝血酶原激活剂选自重组脂化组织因子,或重组脂化组织因子和钙离子。所述方法还包括在激活凝血酶原之前,制备包含凝血酶原的溶液。所述方法还包括对包含凝血酶的溶液进行纯化和进一步处理,得到凝血酶成品。本发明的制备方法采用重组脂化组织因子为激活剂,与兔脑粉相比,可显著提供凝血酶产品的安全性,降低生产成本;与大豆磷脂和蛋黄磷脂相比较,明显提升凝血酶比活性,非常适合现代大规模工业生产。

    一种流动吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺

    公开(公告)号:CN108441490B

    公开(公告)日:2021-11-30

    申请号:CN201810280515.X

    申请日:2018-04-02

    IPC分类号: C12N9/74 C12M1/12 C12M1/02

    摘要: 本发明公开了一种流动吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺,其特征是:将多个带搅拌器的圆柱形容器串联形成自然流动方式,在各容器中放置提前平衡后的凝胶,某一批次待处理血浆存放在第一个容器上方;先定量注入第一个容器中,凝胶搅拌吸附一个单元时间后,再从以一定流量速度放出吸附后的血浆到第二个容器中,与此同时,其它待处理血浆再以相同流量速度流入第一个吸附罐中,即保持第一个容器中的血浆量动态平衡,这时,在第一个容器内血浆的吸附和分离是同时进行的;以此类推,血浆全部通过后,关闭各容器的出口,分别对凝胶进行洗涤、洗脱。这样血浆量不受容器体积限制,易于过程控制并且FⅨ活性回收率较高,无凝胶泄漏和交叉污染的风险。

    一种血浆的凝胶处理设备及方法

    公开(公告)号:CN112574979A

    公开(公告)日:2021-03-30

    申请号:CN202011464382.5

    申请日:2020-12-14

    发明人: 栗云天 王洪春

    摘要: 本发明涉及一种血浆的凝胶处理设备及方法,将凝胶置于有机玻璃柱内,并将血浆从顶部或底部泵入柱内;利用搅拌设备将血浆和凝胶进行特殊的混合搅拌,使血浆中的凝血酶原复合物被充分吸附到填料中,然后经过滤网抽出血浆至血浆罐;将洗涤液从顶部或底部泵入柱内,进行清洗搅拌,去除填料中残留的血浆和杂质,然后通过滤网抽出清洗液;抽出洗脱液及洗脱的凝血酶原复合物,至制品罐;至此完成了一个工艺循环。本发明系统密闭,无污染的风险,不需要多个罐体,所有操作都在有机玻璃柱内完成,通过特殊设计的搅拌装置帮助凝胶和液体透过筛网进行分离,大大提高了透过速度,摆脱了手动操作,容易实现自动化。