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公开(公告)号：CN112481220B
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN202011206761.4
申请日：2020-11-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/20 , C07K16/40 , C07K16/08 , C12P21/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，涉及抗非洲猪瘟病毒解旋酶D1133L的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用小鼠腹腔培养和体外细胞培养杂交瘤细胞7D12制备单克隆抗体，效价测定检测结果表明，本发明杂交瘤细胞株7D12所分泌的单克隆抗体诱导小鼠产生的腹水抗体效价为107，杂交瘤细胞培养上清的效价达到1:1280。本发明制备的单克隆抗体为研究ASFV解旋酶功能及其分子机制积累了关键性的生物学材料，基于该单克隆抗体本身生物学特性建立的间接免疫荧光抗原检测方法为ASFV精准、快速诊断提供了支撑，本发明制备的单克隆抗体能显著抑制或者阻断ASFV复制为ASFV预防和治疗提供了可能的产品支持。
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公开(公告)号：CN113151310A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110176679.X
申请日：2021-02-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种可用作疫苗的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株及其构建方法，该病毒株是亲本非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株的基因缺失弱毒株。本发明发现了DP71L基因是对猪致病性致弱的新靶标基因，并发现联合丧失MGF360‑18R基因、DP71L基因和DP96R基因编码蛋白的功能，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株高剂量(104HAD50)免疫猪后，对猪完全致弱，免疫猪健康，不发病，与免疫猪同居猪核酸也呈阴性，不水平传播，具有较好安全性；且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株的攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN111996201B
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202010212907.X
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 曹伟军 , 蒋保余 , 朱紫祥 , 魏婷 , 郑敏 , 田宏 , 张克山 , 张伟 , 刘永杰 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组A型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供了塞内卡病毒重组核酸、包含所述重组核酸的塞内卡重组病毒、包含所述塞内卡重组病毒的塞内卡重组疫苗株及其制备方法和应用。本发明对SVV/FJ/001株基因缺失突变改造，在其cDNA中融合进A型FMDV的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的基因，且表达产物具有良好的反应原性；获得的疫苗株抗原产能高，致病性显著降低甚至对猪无致病性，灭活疫苗免疫动物后不仅能激发SVA的免疫应答，而且能产生针对融合基因的免疫活性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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公开(公告)号：CN112076314A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
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公开(公告)号：CN112057611A
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN202010932707.1
申请日：2020-09-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及非洲猪瘟病毒E120R蛋白作为免疫抑制剂的应用及免疫抑制位点敲除毒株的构建。本发明首先发现了非洲猪瘟病毒E120R蛋白能够抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IFN‑β的激活，抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IFN‑β及其下游因子ISG56和ISG15的mRNA表达，抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IRF3的磷酸化，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂应用；其次本发明发现了非洲猪瘟病毒E120R蛋白的免疫抑制位点，并通过基因工程手段构建获得了E120R蛋白的免疫抑制位点敲除的非洲猪瘟重组病毒，所述非洲猪瘟重组病毒的天然免疫的能力显著增强，可作为重组疫苗株，能够促进早期免疫应答，诱导高水平抗体产生，提高了生物安全性，及免疫保护效力，具备良好的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111996203A
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN202010212917.3
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 曹伟军 , 朱紫祥 , 宁建刚 , 马坤 , 郝荣增 , 张伟 , 郑敏 , 魏婷 , 蒋保余 , 田宏 , 张克山 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组O型口蹄疫病毒表位基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明获得SVV/FJ/001株全长cDNA，并对其5'UTR进行缺失及突变改造，同时在SVA cDNA中融合进串联的O型FMDV的重组表位基因，构建得到重组口蹄疫抗原表位的塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的口蹄疫B细胞表位和T细胞表位，且表达产物具有良好的反应原性，重组病毒的致病性显著降低甚至对猪无致病性，显著提高了毒株的生物安全性；制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性，在有效激发SVA中和抗体的同时还能产生针对FMDV的特异性抗体，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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公开(公告)号：CN118703423A
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202410961165.9
申请日：2024-07-17
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N5/071 , C12N5/0786 , C12N7/00 , C12N7/02 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种高效分离非洲猪瘟病毒的PAMs/WSh细胞及其分离方法与应用，本发明在常规分离PAMs细胞并重悬后，依次用不同孔径细胞筛过滤除杂、用不含RNA酶的无核酸酶水在20 s内重悬，然后加入含90%胎牛血清+10%的DMSO的细胞冻存液冻存；复苏细胞时先用含两性双抗和庆大双抗RPMI‑1640培养基混悬细胞，过滤离心后用含两性双抗和庆大双抗、12%胎牛血清的1640培养基重悬后培养6‑8 h，接毒，收毒时间为4‑5 d。通过排除红细胞干扰、去除可能存在的细胞团或碎片、筛选目标细胞大小的单细胞悬液，提高了细胞活力，提升了病毒分离率和拷贝数，同时也克服了细胞冻存周期短的问题，获得的PAMs/WSh细胞为非洲猪瘟病毒的高效分离及病毒感染致病机制研究提供了有利工具。
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公开(公告)号：CN118562746A
公开(公告)日：2024-08-30
申请号：CN202410578707.4
申请日：2024-05-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种缺失三个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV‑CN/GS‑2018病毒中联合缺失MGF‑100‑1R、MGF‑100‑2L和MGF‑100‑3L共计3个基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株减毒非洲猪瘟疫苗株；所述减毒非洲猪瘟疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康，且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株攻毒提供良好的免疫保护，可作为安全有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN116236568B
公开(公告)日：2024-07-23
申请号：CN202310138735.X
申请日：2023-01-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 马旭升 , 尚小粉 , 辇晓峰 , 李茜 , 朱紫祥 , 茹毅 , 罗志宽 , 杨帆 , 张克山 , 田宏 , 代军飞 , 冯涛 , 王琦 , 曹伟军 , 党文 , 唐静
IPC: A61K39/39 , C12N15/867 , A01K67/0278 , A61K39/12 , A61P31/20 , A61P29/00
Abstract: 本发明属于病毒免疫学领域，尤其是涉及非洲猪瘟病毒C717R蛋白作为免疫诱导剂或者佐剂的应用。具体如：ASFV C717R蛋白可作为免疫应答诱导剂或佐剂进行应用；ASFV C717R蛋白还可以作为炎症应答的激活剂进行应用。本发明将ASFV C717R重组慢病毒感染小鼠后，发现小鼠血清和动物组织的炎性细胞因子产生且分泌上调。本发明为为ASFV的防控以及C717R蛋白可以作为佐剂激活炎症反应提供了新的支持。
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公开(公告)号：CN116870145A
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN202310648279.3
申请日：2023-06-02
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 茹毅 , 刘华南 , 郭建宏 , 田宏 , 曹伟军 , 卢炳州 , 杨帆 , 申超超 , 张伟 , 李亚军 , 杨洋 , 郝荣增 , 朱紫祥 , 石正旺 , 张克山 , 何继军 , 靳野 , 李丹 , 毛箬青 , 张贵财 , 党文 , 马旭升 , 秦晓东 , 刘湘涛
IPC: A61K39/12 , A61K39/385 , A61K9/14 , A61K47/34 , A61K47/32 , A61K47/36 , A61K47/10 , A61K47/42 , A61K47/02 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒疫苗。本发明首先提供了一种由非洲猪瘟病毒抗原P34蛋白、P30蛋白、P54蛋白、A104R蛋白、X蛋白、E165R蛋白、C129R蛋白、P72蛋白和Y蛋白组成的九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合，其中至少一种抗原与纳米颗粒载体形成含有所述抗原或其抗原表位的纳米颗粒；所述九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒组合能够刺激机体产生较强的免疫反应；制备的九组分抗原非洲猪瘟纳米颗粒疫苗对亲本非洲猪瘟强毒株的攻毒具有良好的免疫保护率，无生物安全风险，突破了国内外现有非洲猪瘟亚单位疫苗无法为猪体提供有效免疫保护的难题。
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