公开(公告)号：CN118703423A

公开(公告)日：2024-09-27

申请号：CN202410961165.9

申请日：2024-07-17

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 吴锦艳 ,  何继军 ,  侯俊玲 ,  申超超 ,  兰喜 ,  刘永杰 ,  马维民 ,  党文 ,  田宏 ,  郑海学

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/0786 ,  C12N7/00 ,  C12N7/02 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种高效分离非洲猪瘟病毒的PAMs/WSh细胞及其分离方法与应用，本发明在常规分离PAMs细胞并重悬后，依次用不同孔径细胞筛过滤除杂、用不含RNA酶的无核酸酶水在20 s内重悬，然后加入含90%胎牛血清+10%的DMSO的细胞冻存液冻存；复苏细胞时先用含两性双抗和庆大双抗RPMI‑1640培养基混悬细胞，过滤离心后用含两性双抗和庆大双抗、12%胎牛血清的1640培养基重悬后培养6‑8 h，接毒，收毒时间为4‑5 d。通过排除红细胞干扰、去除可能存在的细胞团或碎片、筛选目标细胞大小的单细胞悬液，提高了细胞活力，提升了病毒分离率和拷贝数，同时也克服了细胞冻存周期短的问题，获得的PAMs/WSh细胞为非洲猪瘟病毒的高效分离及病毒感染致病机制研究提供了有利工具。