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公开(公告)号：CN114250240B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202111613081.9
申请日：2021-12-27
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一种调节大肠杆菌菌膜形态和高效合成MK‑7的方法，包括如下步骤：步骤一、以大肠杆菌BL21基因组为模板，构建得到△ispB菌株EC1；步骤二、以枯草芽孢杆菌168全基因组为模板，扩增得到hepT基因，通过与pET‑28a载体连接构建得到菌株EC2；步骤三、根据待突变LsrR的氨基酸位点来设计PCR点突变引物，以构建的重组质粒pET‑lsrR为模板，构建得到菌株EC3；步骤四、根据待突变lsrK的氨基酸位点来设计PCR点突变引物，构建得到用于高效合成MK‑7的菌株EC4。本发明通过调控大肠杆菌菌膜形态，促进大肠杆菌维生素K2的MK‑7高效合成。
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公开(公告)号：CN112921048B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202110244068.4
申请日：2021-03-05
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明提供了一种纳豆激酶工程菌及提高纳豆激酶活力的方法，包括如下步骤：步骤一、分别提取枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的基因组DNA；步骤二、以转录调控因子sinR和纳豆激酶编码基因aprN为目的基因，以枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的DNA为模板，分别设计第一引物对和第二引物对进行PCR扩增，以得到sinR PCR产物和aprN PCR产物；步骤三、以sinR PCR产物和aprN PCR产物构建串联sinR与aprN的重组质粒；步骤四、将重组质粒转化感受态细胞，以得到阳性克隆菌落；步骤五、对阳性克隆菌落依次进行种子培养基培养和发酵培养。本发明将群体感应调控因子与纳豆激酶编码基因串联表达，提高纳豆激酶含量及活力。
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公开(公告)号：CN109837289B
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN201910233452.7
申请日：2019-03-26
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明公开了一种调控纳豆芽孢杆菌自凝集能力和菌膜特性的方法。该方法通过改变非特异性DNA结合蛋白HBsu编码基因表达水平和蛋白表达量达到改变纳豆芽孢杆菌自凝集能力和菌膜特性，并进一步改变纳豆芽孢杆菌合成维生素K2的能力。本发明为维生素K2优良菌株的选育提供了一条新思路，在食品、生物制药领域具有较大的实际意义和广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116064633B
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202211370265.1
申请日：2022-11-03
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一种构建高效生物合成维生素K2工程菌的方法，包括如下步骤：步骤一、构建得到△pbuE菌株EC1；步骤二、以菌株EC1全基因组为模板，用PdegQ启动子序列替换枯草芽孢杆菌法呢基二磷酸合酶基因ispA的原始启动子，得到菌株EC2；步骤三、以菌株EC2全基因组为模板，敲除1‑脱氧木酮糖‑5‑磷酸合酶基因dxs，得到菌株EC3；步骤四、以克雷伯氏菌全基因组为模板，扩增得到dxs基因，通过与pHY‑P43载体连接转化至菌株EC3中，得到EC4。本发明通过启动子替换和关键基因优选构建高产MK‑7的枯草芽孢杆菌，最终菌株EC4的MK‑7产量较原始菌株提高了5.42倍。
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公开(公告)号：CN114231554B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202111614876.1
申请日：2021-12-27
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种维生素K2系列产物的生物合成方法，包括如下步骤：步骤一、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepS基因，得到△hepS菌株BS01；步骤二、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepT基因，得到△hepT菌株BS02；步骤三、PCR扩增大肠杆菌yqiD基因或Bacillus subtilis168的hepT基因；将所得PCR产物连接表达载体pHY‑P43得到重组质粒，之后转到BS02，即得产生维生素K2系列产物的工程菌。该发明对于获取不同食品级维生素K2同系物具有十分重要的意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114231554A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111614876.1
申请日：2021-12-27
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种维生素K2系列产物的生物合成方法，包括如下步骤：步骤一、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepS基因，得到△hepS菌株BS01；步骤二、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepT基因，得到△hepT菌株BS02；步骤三、PCR扩增大肠杆菌yqiD基因或Bacillus subtilis168的hepT基因；将所得PCR产物连接表达载体pHY‑P43得到重组质粒，之后转到BS02，即得产生维生素K2系列产物的工程菌。该发明对于获取不同食品级维生素K2同系物具有十分重要的意义。
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公开(公告)号：CN106591253B
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201611056729.6
申请日：2016-11-26
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明公开了一种4‑羟苯甲酸‑聚异戊二烯转移酶突变体及其制备方法和应用，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8所示。所述突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.7所示。本发明提供的突变体酶，蛋白表达水平有明显的降低，而维生素K2生物合成能力有所提高，UbiA合成量的减少，促进了MenA的合成，从而最终促进了维生素K2的生物合成。
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公开(公告)号：CN109837289A
公开(公告)日：2019-06-04
申请号：CN201910233452.7
申请日：2019-03-26
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明公开了一种调控纳豆芽孢杆菌自凝集能力和菌膜特性的方法。该方法通过改变非特异性DNA结合蛋白HBsu编码基因表达水平和蛋白表达量达到改变纳豆芽孢杆菌自凝集能力和菌膜特性，并进一步改变纳豆芽孢杆菌合成维生素K2的能力。本发明为维生素K2优良菌株的选育提供了一条新思路，在食品、生物制药领域具有较大的实际意义和广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN106222208A
公开(公告)日：2016-12-14
申请号：CN201610619244.7
申请日：2016-08-01
Applicant: 安徽工程大学
CPC classification number: C12P7/66 , C12N9/16 , C12Y301/02014
Abstract: 本发明公开了一种提高维生素K2胞外分泌能力的方法，该方法通过分子生物学手段调节黄杆菌细胞膜脂肪酸的饱和度，提高了黄杆菌细胞膜通透性，解除了维生素K2胞内合成过程中中间代谢物和关键酶对其产生的反馈抑制，从而促进了维生素K2胞外分泌的能力，提高了维生素K2的总产量。本发明为维生素K2工业化生产提供了一条菌种改造的新思路，在食品、生物制药领域具有较大的实际应用价值和广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116064633A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211370265.1
申请日：2022-11-03
Applicant: 安徽工程大学
Abstract: 本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一种构建高效生物合成维生素K2工程菌的方法，包括如下步骤：步骤一、构建得到△pbuE菌株EC1；步骤二、以菌株EC1全基因组为模板，用PdegQ启动子序列替换枯草芽孢杆菌法呢基二磷酸合酶基因ispA的原始启动子，得到菌株EC2；步骤三、以菌株EC2全基因组为模板，敲除1‑脱氧木酮糖‑5‑磷酸合酶基因dxs，得到菌株EC3；步骤四、以克雷伯氏菌全基因组为模板，扩增得到dxs基因，通过与pHY‑P43载体连接转化至菌株EC3中，得到EC4。本发明通过启动子替换和关键基因优选构建高产MK‑7的枯草芽孢杆菌，最终菌株EC4的MK‑7产量较原始菌株提高了5.42倍。
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