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公开(公告)号：CN112500478A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011452597.5
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6及其制备方法。ScFv抗体VH‑VLλ6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ6进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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公开(公告)号：CN111748563A
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN202010661680.7
申请日：2020-07-10
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种可用作疫苗的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株及其构建方法，该病毒株是亲本非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株的基因缺失弱毒株。本发明发现了DP71L基因是对猪致病性致弱的新靶标基因，并发现联合丧失MGF360-18R基因、DP71L基因和DP96R基因编码蛋白的功能，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株高剂量(104HAD50)免疫猪后，对猪完全致弱，免疫猪健康，不发病，与免疫猪同居猪核酸也呈阴性，不水平传播，具有较好安全性；且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株的攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN114107228A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111335696.X
申请日：2021-11-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 冯涛 , 李攀 , 刘华南 , 石正旺 , 马昭 , 申超超 , 齐晓兰 , 吴盼雪 , 张克山 , 李丹 , 党文 , 杨波 , 王琦 , 曹丽艳 , 朱紫祥 , 田宏 , 郭建宏 , 刘湘涛
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种缺失十二个基因的减毒非洲猪瘟病毒株及作为疫苗的应用。本发明在ASFV CN/GS 2018病毒中联合缺失G‑ACD‑00190、MGF 110‑9L、G‑ACD‑00210、MGF 360(9L、10L、11L、12L、13L、14L)、MGF 505(1R、2R、3R)基因，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株减毒非洲猪瘟疫苗株；所述减毒非洲猪瘟疫苗株免疫猪后对猪完全致弱、免疫猪健康、免疫后在猪血液内检测不到病毒的存在，且能够对ASFVCN/GS/2018强毒株攻毒提供100％免疫保护，可作为安全有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN113151310A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110176679.X
申请日：2021-02-09
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种可用作疫苗的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株及其构建方法，该病毒株是亲本非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018分离株的基因缺失弱毒株。本发明发现了DP71L基因是对猪致病性致弱的新靶标基因，并发现联合丧失MGF360‑18R基因、DP71L基因和DP96R基因编码蛋白的功能，降低了亲本毒株的毒性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株高剂量(104HAD50)免疫猪后，对猪完全致弱，免疫猪健康，不发病，与免疫猪同居猪核酸也呈阴性，不水平传播，具有较好安全性；且能够对ASFV CN/GS/2018强毒株的攻毒提供100％免疫保护，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗，具有极大的社会价值。
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公开(公告)号：CN112592401B
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN202011452599.4
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11及其制备方法。ScFv抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ11，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ11进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112522444A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011529612.1
申请日：2020-12-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒LAMP‑CRISPR检测用组合物、检测试剂盒和检测方法，该组合物包括LAMP扩增引物、crRNA和ssDNA荧光报告探针。该试剂盒包括上述组合物，还包括用于LAMP扩增的LAMP反应缓冲液、Bst DNA聚合酶和p72质粒模板，以及用于CRISPR Cas12a检测体系的LbCas12a、RNase抑制剂、CRISPR反应缓冲液。本发明采用LAMP方法与CRISPR相结合的技术，可高效、精准并且不需借助大型仪器达到检测结果可视化的目的，为ASFV的快速诊断提供了新的技术支持。本发明建立的LAMP‑CRISPR对ASFV抗原分子的检测具有较高的灵敏度，能够检测到单拷贝即7×100copies/μL的质粒浓度。
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公开(公告)号：CN116444652A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310039309.0
申请日：2023-01-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒特异性单链抗体的制备方法。包括以下步骤：S1：提取猪淋巴细胞总RNA并合成cDNA，并以所述cDNA为模板，扩增组装ScFv的基因Vκ/Vλ‑linker‑VH；S2：通过同源重组反应将ScFv的基因插入到噬菌粒中，转化感受态细胞，培养、分离纯化噬菌体，获得VH‑Vκ与VH‑Vλ免疫库；S3：筛选免疫库中的特异性抗体，获得目标ScFv；S4：对S3筛选到的目标ScFv进行ELISA鉴定，获得噬菌体阳性单克隆；S5：对S4的噬菌体阳性单克隆进行表达、验证。本发明通过构建噬菌体抗体库，筛选出了具有生物活性强、结合抗原能力强的抗ASFV单链抗体。
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公开(公告)号：CN113181154B
公开(公告)日：2021-12-21
申请号：CN202110293021.7
申请日：2021-03-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K31/195 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于非洲猪瘟治疗技术领域，具体涉及一种EGTA用于预防或治疗非洲猪瘟的新用途。本发明意外发现，EGTA能够显著抑制非洲猪瘟病毒蛋白p72的表达，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制非洲猪瘟病毒的感染；并且EGTA能够显著抑制非洲猪瘟病毒的复制，降低非洲猪瘟病毒感染后的病毒滴度，可作为非洲猪瘟病毒的抑制剂，用于预防或治疗非洲猪瘟。
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公开(公告)号：CN113181154A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110293021.7
申请日：2021-03-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K31/195 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于非洲猪瘟治疗技术领域，具体涉及一种EGTA用于预防或治疗非洲猪瘟的新用途。本发明意外发现，EGTA能够显著抑制非洲猪瘟病毒蛋白p72的表达，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制非洲猪瘟病毒的感染；并且EGTA能够显著抑制非洲猪瘟病毒的复制，降低非洲猪瘟病毒感染后的病毒滴度，可作为非洲猪瘟病毒的抑制剂，用于预防或治疗非洲猪瘟。
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公开(公告)号：CN112500478B
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202011452597.5
申请日：2020-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种抗非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6及其制备方法。ScFv抗体VH‑VLλ6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，ScFv抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离淋巴细胞的总mRNA，通过RT‑PCR的方法得到总cDNA片段，以cDNA为模板，在相应的带有Linker接头的引物的作用下，通过SOE‑PCR的方法得到猪源ScFv抗体基因序列，将ScFv抗体基因序列构建至PET‑30a载体，转化BL21（DE3）感受态细胞，筛选得到一个针对于非洲猪瘟病毒的ScFv抗体VH‑VLλ6，对筛选得到的ScFv抗体VH‑VLλ6进行初步活性鉴定发现此抗体具有非洲猪瘟反应活性。本发明的提出为非洲猪瘟的早期诊断与防控提供新的材料，为尽快控制非洲猪瘟的疫情传播提供了新的技术支持。
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