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公开(公告)号：CN109628478A
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201910007390.8
申请日：2019-01-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及稳定表达CD63‑GFP的PK‑15细胞株及其构建和应用，所述细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C2018253。构建方法包括以下步骤：目的基因合成、目的基因和慢病毒载体双酶切、重组质粒构建和鉴定、转染293T细胞、感染PK‑15细胞、细胞株筛选验证。采用本发明方法构建的稳定表达CD63‑GFP的PK‑15细胞株可用于细胞内、外的外泌体含量评估。利用本发明构建的稳定表达CD63‑GFP融合蛋白的PK‑15细胞株，可用荧光观察绿色荧光蛋白或通过流式细胞仪方便地评估外泌体的分泌量。该细胞株的建立为研究外泌体在病毒感染PK‑15细胞时的应用提供了可靠材料。
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公开(公告)号：CN108103078B
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201810003888.2
申请日：2018-01-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/41 , C12N7/00 , A61K39/125 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种分离的塞尼卡谷病毒核酸、一种塞尼卡谷病毒株、一种包含所述塞尼卡谷病毒株的塞尼卡谷病毒疫苗及其制备方法，以及所述塞尼卡谷病毒疫苗在制备用于预防和/或控制动物塞尼卡谷病毒引起的相关疾病的药物中的用途。
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公开(公告)号：CN108912225A
公开(公告)日：2018-11-30
申请号：CN201810843478.9
申请日：2018-07-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/08 , C07K1/34 , G01N33/535 , G01N33/569
Abstract: 本发明提供了一种基于双峰驼抗羊痘病毒VHH-4-1及用途，属于生物技术领域，包含抗山羊痘病毒VHH-4-1，VHH-4-1的筛选、表达、纯化、功能化标记以及活性验证，山羊痘病毒的浓缩、纯化，试剂盒各项指标的优化等。本发明提供的试剂盒由于使用了功能化标记的VHH-4-1，避免了一抗、二抗以及抗抗体等步骤，提高了灵敏性、稳定性，缩短了时间，节约了资源。突破了传统Elisa方法费时、费力等缺陷。本发明的提出为建立敏感山羊痘病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理奠定基础；也为本发明研制出的山羊痘病毒抗体固相竞争Elisa试剂盒提供了关键标识物；另外，利用山羊痘弱毒苗经细胞扩大培养、浓缩、纯化后作为包被抗原，提高了灵敏度。
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公开(公告)号：CN108384893A
公开(公告)日：2018-08-10
申请号：CN201810415406.4
申请日：2018-05-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的实时荧光定量RT-PCR试剂盒及其应用。所述试剂盒包含分别用于检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的引物以及探针，优选的，所述试剂盒中还包含核酸提取液、2×Direct qRT-PCR Mix、酶混合液、阴性对照、阳性对照。使用本发明的试剂盒检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒，具有特异性高，灵敏度高，稳定性好，操作简便等优点，用户无需额外提取病毒RNA，无需反转录，只需将待检样品加入反应管中，利用荧光信号的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析，即可计算待检样品拷贝数。不仅适用于科研单位定量分析，而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN107741495A
公开(公告)日：2018-02-27
申请号：CN201710771922.6
申请日：2017-08-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/535
CPC classification number: G01N33/56983 , G01N33/535 , G01N2333/08
Abstract: 本发明公开了一种用于塞内卡病毒抗原检测的双抗夹心ELISA试剂盒及其应用。所述的试剂盒包括塞内卡病毒豚鼠抗IgG包被的酶标板以及HRP标记的塞内卡病毒兔抗IgG。本发明使用HRP标记兔抗IgG，替代传统ELISA中的一抗和二抗，简化了操作步骤。同时通过改变包被稳定工艺将SVV豚鼠抗IgG包被到固相载体表面，改变了酶标抗体稀释液的配制工艺，可使酶标抗体工作液稳定保存而不改变其活性和效价，建立了特异检测SVV抗原的双抗夹心ELISA试剂盒及其检测方法。本发明的提出弥补了SVV ELISA抗原检测的空缺，克服了现有病毒分离检测SVV抗原重复性和敏感性低、操作程序繁琐的问题，为SVV抗原检测提供了一种有效的技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107304419A
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201610255084.2
申请日：2016-04-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12N15/1096 , C07K16/1081 , C07K2317/569 , C12N15/81 , C40B40/02 , C40B50/06
Abstract: 本发明公开了一种抗猪瘟病毒VHH抗体的酵母cDNA文库及其构建方法和用途，本发明从猪瘟C株弱毒疫苗免疫的骆驼的外周血中分离得到淋巴细胞，提取分离到的淋巴细胞的总mRNA，通过RT-PCR的方法得到抗猪瘟病毒VHH抗体的cDNA片段，将VHH抗体的cDNA片段与pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞，得到抗猪瘟病毒VHH抗体的酵母cDNA文库。对所构建的酵母cDNA文库的容量及多态性进行了鉴定，结果表明该文库的滴度约为5.5×106cfu/ml，且多样性好，文库的重组率为100％。采用血凝抑制试验对抗猪瘟病毒VHH抗体的酵母cDNA文库进行初步功能性鉴定，表明所构建的酵母文库中存在具有中和活性的抗猪瘟病毒VHH抗体。本发明的提出为筛选抗猪瘟病毒VHH抗体提供了平台，并且为猪瘟的早期治疗和诊断提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN106148568A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610536974.0
申请日：2016-07-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
Abstract: 本发明公开了一种免疫磁珠试剂盒及其在检测小反刍兽疫病毒抗原中的用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV N蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105821480A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610288469.9
申请日：2016-05-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗羊口疮病毒的双峰驼VHH重链单域抗体cDNA文库及其制备方法。其文库包含羊口疮疫苗免疫骆驼的抗原剂量、免疫程序和血清抗体效价，制备文库包括以下步骤：骆驼外周血淋巴细胞分离、总RNA提取及mRNA分离、纯化；CDSⅢ和SMART引物逆转录合成全长cDNA，设计两套扩增引物，采用同源重组的方法将扩增产物与pGADT7共转染酵母细胞Y187；构建骆驼抗羊口疮病毒的VHH基因cDNA文库；计算文库库容量；扩增cDNA文库进行质量评价。本发明针对羊口疮病毒构建的cDNA文库是一种具备病毒特异性、生物学活性好、结合抗原能力强、具有潜在中和功能的抗体文库，尤其是单域抗体之类的新型抗体，对于建立羊口疮病毒的临床诊断方法，研究病毒的感染机理具有极其重要的作用。
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公开(公告)号：CN105603057A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201510724479.8
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2561/113 , C12Q2561/101 , C12Q2545/114 , C12Q2531/113
Abstract: 一种用于检测绵羊肺腺瘤病毒的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒，所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物，所述检测方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。所述方法能快速、敏感、准确以及低成本地对绵羊肺腺瘤病毒进行检测及定量分析。本发明设计了特异性针对绵羊肺腺瘤病毒的引物及探针，优化并组装成试剂盒。与普通RT-PCR方法相比，本发明省时、省力，成本较低。
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公开(公告)号：CN105274254A
公开(公告)日：2016-01-27
申请号：CN201510719383.2
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2531/113 , C12Q2561/101 , C12Q2561/113
Abstract: 一种用于检测PRRSV缺失变异株的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer 、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物，所述检测方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。本发明弥补了PRRSV缺失变异株检测上的薄弱环节，与普通RT-PCR方法相比，本发明省时、省力，成本较低，并且比普通PCR的灵敏度高，能快速、敏感、准确以及低成本地对猪繁殖与呼吸综合征缺失变异株病毒进行检测及定量分析。
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