公开(公告)号：CN109628478B

公开(公告)日：2019-10-08

申请号：CN201910007390.8

申请日：2019-01-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  徐守兴 ,  田宏 ,  茹毅 ,  李丹 ,  朱紫祥 ,  杨帆 ,  刘湘涛

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10 ,  G01N21/64 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及稳定表达CD63‑GFP的PK‑15细胞株及其构建和应用，所述细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C2018253。构建方法包括以下步骤：目的基因合成、目的基因和慢病毒载体双酶切、重组质粒构建和鉴定、转染293T细胞、感染PK‑15细胞、细胞株筛选验证。采用本发明方法构建的稳定表达CD63‑GFP的PK‑15细胞株可用于细胞内、外的外泌体含量评估。利用本发明构建的稳定表达CD63‑GFP融合蛋白的PK‑15细胞株，可用荧光观察绿色荧光蛋白或通过流式细胞仪方便地评估外泌体的分泌量。该细胞株的建立为研究外泌体在病毒感染PK‑15细胞时的应用提供了可靠材料。

公开(公告)号：CN109628478A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201910007390.8

申请日：2019-01-04

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张克山 ,  徐守兴 ,  田宏 ,  茹毅 ,  李丹 ,  朱紫祥 ,  杨帆 ,  刘湘涛

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10 ,  G01N21/64 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及稳定表达CD63‑GFP的PK‑15细胞株及其构建和应用，所述细胞株的保藏编号为：CCTCC NO:C2018253。构建方法包括以下步骤：目的基因合成、目的基因和慢病毒载体双酶切、重组质粒构建和鉴定、转染293T细胞、感染PK‑15细胞、细胞株筛选验证。采用本发明方法构建的稳定表达CD63‑GFP的PK‑15细胞株可用于细胞内、外的外泌体含量评估。利用本发明构建的稳定表达CD63‑GFP融合蛋白的PK‑15细胞株，可用荧光观察绿色荧光蛋白或通过流式细胞仪方便地评估外泌体的分泌量。该细胞株的建立为研究外泌体在病毒感染PK‑15细胞时的应用提供了可靠材料。