一种产酪醇的重组大肠杆菌及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN110452865B

    公开(公告)日:2021-05-28

    申请号:CN201910754497.9

    申请日:2019-08-15

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 陈献忠 徐微 沈微

    Abstract: 本发明公开了一种产酪醇的重组大肠杆菌及其构建方法和应用,属于生物工程技术领域。所述的大肠杆菌异源表达了密码子优化后的酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因ARO10*。该重组大肠杆菌是在大肠杆菌基因组的lacI位点,trpE位点,pabB位点,pabA位点,pykF位点的五个位点进行删除的同时整合上ARO10*基因,得到了含多个拷贝的ARO10*基因的菌株。在上述重组菌的基础上,随机在多个位点进行了ARO10*基因的整合,发现在yccX位点插入ARO10*基因,能获得高产酪醇的菌株。利用该菌株发酵不需要诱导剂和抗生素。发酵48h,酪醇产量可达到28mM。

    一种耐热型脱硫菌筛选培养液及其筛选方法

    公开(公告)号:CN109321463B

    公开(公告)日:2021-03-30

    申请号:CN201811267377.8

    申请日:2018-10-29

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种耐热型脱硫菌筛选培养液及其筛选方法,属于微生物、环境工程技术领域。许多耐热型脱硫菌是生活在温泉等环境中的自养型细菌,由于其生长速度慢,经常难以筛选得到。本发明通过优化脱硫菌筛选培养液并加入辅助筛选脱硫菌的非脱硫菌黄热厌氧芽孢杆菌Anoxybacillus flavithermus,使得本发明得到的培养液能够筛选出普通脱硫菌培养液无法筛选出的低含量的脱硫菌,有效的避免了样品中脱硫菌被漏筛的问题,大大地提高了耐热型脱硫菌的筛选效率,尤其是对温泉水温度不超过75℃的温泉中耐热型脱硫菌的筛选非常高效,为耐热型脱硫菌的筛选提供了一种简单易行且高效的筛选方法。

    一种熊蜂生假丝酵母强组成型启动子及其应用

    公开(公告)号:CN112266914A

    公开(公告)日:2021-01-26

    申请号:CN202011156814.6

    申请日:2020-10-26

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种熊蜂生假丝酵母强组成型启动子及其应用。本发明以熊蜂生假丝酵母为研究对象,预测、克隆、筛选、评价强组成型启动子。以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,通过上述所选启动子驱动其表达,分析绿色荧光强度差异及转录水平差异,最终获得了一个具有强转录活性的组成型启动子PX。该启动子与已知强组成型PGPD启动子相比,在以葡萄糖或油酸为唯一碳源及不同培养时期均具有最高强度的转录活性。该实验在熊蜂生假丝酵母中首次以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,通过转录组水平分析得到一段具有转录活性强的DNA序列,具有良好的应用前景,丰富了合成生物学元件,同时也为该菌种在其基因工程改造及外源基因表达奠定了理论基础。

    一种高稳定性葡聚糖酶的制备方法

    公开(公告)号:CN111549017A

    公开(公告)日:2020-08-18

    申请号:CN202010459385.3

    申请日:2020-05-27

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种高稳定性葡聚糖酶的制备方法,属于酶工程技术领域。本发明将相同酶活的葡聚糖酶AnEglA6和BglA等体积混合,得到复配型酶液;取10×处理液BG01加入复配型酶液中混合,58-62℃保温25-35min,冰水浴冷却;加入第二种10×处理液BG02,在58-62℃保温25-35min,冰水浴冷却;继续加入10×处理液BG03,充分混合,即得高稳定性葡聚糖酶。采用本发明方法获得的葡聚糖酶SL04在pH4~6.5范围内活性稳定在60%以上,在4℃环境存储7天酶活下降幅度在40%以内。本发明获得的高稳定性葡聚糖酶在酒精发酵等领域有应用前景。

    一种果糖基转移酶及其编码基因与应用

    公开(公告)号:CN104774817B

    公开(公告)日:2020-06-09

    申请号:CN201510179542.4

    申请日:2015-04-15

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明涉及基因工程领域,具体地,一种果糖基转移酶FWT01及其编码基因与应用。本发明提供了一种来源于黑曲霉(Aspergillus niger)的果糖基转移酶FWT01,其氨基酸序列如序列1所示,且本发明提供了编码上述果糖基转移酶的编码基因FWT‑01。本发明的果糖基转移酶具有以下性质:1)可在毕赤酵母(Pichia pastoris)、大肠杆菌(Escherichia coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等宿主中异源表达;2)具有较宽的温度稳定性性,在50以下酶稳定;3)具有较宽的pH稳定范围:在pH4.0‑9.0条件下稳定(酶活力残留>90%);4)具有高低聚果糖转化率,其浓度为57.3%(w/w)。

    一种性能改善的普鲁兰酶嵌合体及高产该嵌合体的巴斯德毕赤酵母突变株

    公开(公告)号:CN105802943B

    公开(公告)日:2019-07-16

    申请号:CN201610306855.6

    申请日:2016-05-11

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种性能改善的普鲁兰酶嵌合体及高产该嵌合体的巴斯德毕赤酵母突变株,属于微生物、酶工程技术及淀粉加工领域。本发明对来源于Bacillus deramificans和Bacillus naganoensis的普鲁兰酶编码基因进行密码子优化,利用DNA Shuffling进行分子改组,得到一种嵌合体基因,嵌合体酶在酸性条件下能保持较高酶活,同时比酶活高于来源于Bacillus deramificans的普鲁兰酶。编码嵌合体的基因WXP03在巴斯德毕赤酵母细胞内表达出普鲁兰酶酶活,重组酶最适作用温度55℃,最适pH4.5酶活半衰期约18小时,在55℃,pH4.0酶活半衰期约为12小时。进一步诱变筛选获得一株摇瓶发酵酶活水平明显提高的巴斯德毕赤酵母突变株。突变株在5 L发酵罐上的发酵酶活达1800 U/mL。

    一种提高普鲁兰酶稳定性的发酵液处理方法

    公开(公告)号:CN106011114B

    公开(公告)日:2019-05-24

    申请号:CN201610601731.0

    申请日:2016-07-28

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种提高普鲁兰酶稳定性的发酵液处理方法,属于酶工程和发酵工程技术领域。本发明采用一种10×发酵液处理溶液处理来源于重组菌解淀粉芽孢杆菌BF7658/pUC980‑BdP的普鲁兰酶发酵液,经过处理的发酵液中普鲁兰酶酶活稳定性明显高于未经处理的发酵液。本发明所述方法在以重组菌解淀粉芽孢杆菌BF7658/pUC980‑BdP为菌种发酵制备普鲁兰酶工艺的后提取阶段可以减少酶活损失。

    一种以中性普鲁兰酶催化酶法制备粉丝的方法

    公开(公告)号:CN107156799A

    公开(公告)日:2017-09-15

    申请号:CN201710387714.6

    申请日:2017-05-27

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明涉及一种以中性普鲁兰酶催化酶法制备粉丝的方法,属于食品工程和酶工程技术领域。其以淀粉为原料制作粉丝时,在制芡糊阶段,在淀粉糊化后在糊化液中加入重组普鲁兰酶GsP,根据淀粉的实际情况在60℃适当保温;然后继续按照粉丝的传统制作工艺加入干淀粉进行揉粉团并继续其他的工艺步骤。利用本方法制作生产的粉丝的质量与传统工艺相比基本相同。在原有的酶法粉丝制作方法的基础上,利用本发明的方法可以大幅度减少酶的使用。

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