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公开(公告)号：CN117776899A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311556933.4
申请日：2023-11-21
Applicant: 淮北创新生物新材料有限责任公司 , 江南大学
IPC: C07C51/02 , C07C51/42 , C07C51/43 , C07C51/47 , C07C51/487 , C07C55/10 , C12P7/46 , C12N1/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种从含有琥珀酸镁的发酵液中纯化琥珀酸的方法，包括以下步骤：对含琥珀酸的发酵液进行菌体自聚集去除菌体，对去除菌体的发酵液进行微滤处理，对得到的发酵液进行超滤处理；对超滤得到的发酵液进行脱色处理，并过滤；将过滤得到的发酵液通过填充有H+形式的阳离子交换树脂；结晶琥珀酸以形成中间晶体，并将中间晶体与发酵液分离，将分离后的发酵液再循环至超滤步骤；回收中间晶体，进行复溶脱色，结晶并离心，将分离后的处理液再循环至结晶步骤，并回收纯化后的琥珀酸。
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公开(公告)号：CN114015634B
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN202111299764.1
申请日：2021-11-04
Applicant: 江南大学 , 淮北创新生物新材料有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种生物工程技术领域，尤其涉及一种高产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用。其中，高产琥珀酸的重组大肠杆菌是将编码大肠杆菌中甲酸脱氢酶的基因fdhF替换为来自假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的外膜蛋白调节器OmpR。本发明采用CRISPR‑cas9基因编辑技术将宿主菌FMME‑N‑5中编码甲酸脱氢酶基因fdhF替换为假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并运用RBS序列和启动子策略上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的关键外膜蛋白调节器OmpR，所得到的重组大肠杆菌没有抗性，耐渗透压并可高效生产琥珀酸。
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公开(公告)号：CN114015634A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111299764.1
申请日：2021-11-04
Applicant: 江南大学 , 淮北创新生物新材料有限责任公司
Abstract: 本发明涉及一种生物工程技术领域，尤其涉及一种高产琥珀酸的重组大肠杆菌及其构建方法和应用。其中，高产琥珀酸的重组大肠杆菌是将编码大肠杆菌中甲酸脱氢酶的基因fdhF替换为来自假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的外膜蛋白调节器OmpR。本发明采用CRISPR‑cas9基因编辑技术将宿主菌FMME‑N‑5中编码甲酸脱氢酶基因fdhF替换为假丝酵母的甲酸脱氢酶基因fdh1，并运用RBS序列和启动子策略上调耐酸胁迫和耐渗透压胁迫的关键外膜蛋白调节器OmpR，所得到的重组大肠杆菌没有抗性，耐渗透压并可高效生产琥珀酸。
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公开(公告)号：CN118726220A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202411030305.7
申请日：2024-07-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产L‑缬氨酸的谷氨酸棒杆菌重组菌及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明在谷氨酸棒杆菌中过表达了谷氨酸棒杆菌本源的转酮酶(tkt)，对丙酮酸脱氢酶(aceE)第一位核苷酸进行了由A突变为G的替换，并过表达了谷氨酸棒杆菌本源磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(pck)，富集了丙酮酸池，增强了L‑缬氨酸生产的碳流，构建了高效的L‑缬氨酸生产菌株。本发明构建的重组菌VL‑7在5L发酵罐发酵44h的L‑缬氨酸积累量达100.8g L‑1，转化率为46.1％，生产强度为2.29g/L/h。
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公开(公告)号：CN118460485A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410553982.0
申请日：2024-05-07
Applicant: 山东凯密斯新材料科技有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用于生产L‑天冬酰胺的天冬酰胺合成酶A突变体及应用，属于生物工程技术领域。本发明以L‑天冬氨酸和ATP为原料，利用活性被提高的天冬酰胺合成酶A(EcAsnA)突变体进行L‑天冬酰胺的生物合成，整体催化过程简单高效。利用纯化酶进行氨连接反应，L‑天冬酰胺生产强度达到20.28g/L/h。相较于目前能够催化L‑天冬氨酸生成L‑天冬酰胺的亲本，EcAsnAL109K/K58R具有更高的催化效率，其催化活性提升至2603.64U/mg，是亲本的(497.15U/mg)的4.24倍。本发明为快速合成L‑天冬酰胺提供了新的合成方法，为L‑天冬酰胺工业化生产提供了新思路。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117925548A
公开(公告)日：2024-04-26
申请号：CN202311680120.6
申请日：2023-12-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用于合成5‑羟基‑L‑高亮氨酸的Fe(II)/α‑KG双加氧酶突变体及应用，属于生物工程技术领域。本发明通过理性蛋白质工程对BlAH的蛋白质结构进行改造，克服了野生型BlAH对L‑高亮氨酸C4的高催化活性，成功实现利用突变体酶进行5‑羟基‑L‑高亮氨酸的生物合成，其中该突变体催化活性是野生型的27倍。以100mM L‑高亮氨酸为底物规模化制备5‑羟基‑L‑高亮氨酸，对应产物摩尔浓度为97.6mM，产物转化率为97.6％，为基于天然氨基酸底物合成多样化的非天然氨基酸提供新的合成方法。
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公开(公告)号：CN117143839A
公开(公告)日：2023-12-01
申请号：CN202311020495.X
申请日：2023-08-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了甲基杆菌亚砜合成酶MpEgtB突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供饿了一种可以高效制备麦角硫因的甲基杆菌来源的亚砜合成酶MpEgtB突变体及其改造方法，并利用该突变体蛋白催化组氨酸三甲基内盐，以L‑Cys为硫供体直接转化为组氨酸三甲基内盐基半胱氨酸亚砜，以及进一步将得到的突变体与耻垢分枝杆菌来源的MsEgtD、MsEgtE偶联，以L‑His和L‑Met为底物制备L‑EGT。以最优突变体菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，在5L发酵罐下采用连续补料策略，转化48h，L‑EGT产量达到8.32g/L。该生产过程简单、杂质少，具有重要的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN116904416A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202310870816.9
申请日：2023-07-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效生产四氢嘧啶的重组大肠杆菌及其构建方法，属于生物工程领域。本发明以大肠杆菌BL21为宿主，pET等系列质粒为载体，在胞内异源表达L‑二氨基丁酸转氨酶(EctBT15S/T49A/Y293M)、L‑二氨基丁酸乙酰转移酶(EctA)和四氢嘧啶合成酶(EctC)，通过质粒拷贝数优化得到最优表达载体及基因组合方式，并通过不同水平RBS调控三酶表达水平从而进一步优化体内三酶的酶活比例。以最优重组菌株作为生物催化剂进行全细胞转化，四氢嘧啶最高产量达到87.36g/L。该生产过程简单、原料易得、杂质少，具有较好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN116904381A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202310951198.0
申请日：2023-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株产己二酸的重组大肠杆菌的构建及其应用，属于生物技术领域。本发明将大肠杆菌进行改造，敲除了3‑脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB，过表达了aroB、aroD、aroGFBR、ppsA、tktA、talA、GsQOR和gdh，并通过RBS序列调控己二酸生产的靶点基因片段烯酸还原酶编码基因GsQOR和葡萄糖脱氢酶编码基因gdh的表达强度，再过表达调控顺,顺‑粘康酸的靶点基因aroZ、aroY和catA，最后经发酵放大验证己二酸产量，在48h达5.3g/L。本发明为从顺,顺‑粘康酸生产己二酸提供了新方法，具有较好发展前景，有利于用于工业化生产。
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公开(公告)号：CN116144516B
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310228686.9
申请日：2023-03-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株产丁二酸的酿酒酵母及其应用，属于生物工程技术领域。所述酿酒酵母已于2023年2月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2023098，保藏地址为中国武汉，武汉大学。本发明的酿酒酵母FMME‑SuA912，表现出耐受低pH的能力，可以在pH 3.5条件下正常生长并发酵产丁二酸。经发酵罐扩大培养，发酵120h丁二酸产量和产率分别达到了41.8g/L和0.34g/g，具有低pH发酵生产丁二酸的工业化应用潜力。
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